山核桃CcLFY基因啟動(dòng)子的克隆及功能分析.pdf

1、為了解山核桃LEAFY同源基因CcLFY的表達(dá)調(diào)控規(guī)律，從分子角度解釋山核桃成花特點(diǎn)，我們應(yīng)用染色體步移法克隆到一條1345bp的片段，經(jīng)過(guò)軟件分析該序列含有低溫響應(yīng)元件、光響應(yīng)元件、ABA響應(yīng)元件和一些其他的調(diào)控序列，推測(cè)CcLFY的表達(dá)受低溫、光照等調(diào)控，但沒有發(fā)現(xiàn)典型的TATA-box和CAAT-box結(jié)構(gòu)，僅在起始密碼子上游-86bp和-252bp處發(fā)現(xiàn)類似TATA-box和CAAT-box的結(jié)構(gòu)。經(jīng)過(guò)缺失驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)缺失掉這段結(jié)

2、構(gòu)后的啟動(dòng)子片段仍然具有啟動(dòng)能力，因此我們推斷CcLFY啟動(dòng)子為TATA-Iess啟動(dòng)子。將山核桃CcLFY啟動(dòng)子與擬南芥和楊樹LFY基因啟動(dòng)子進(jìn)行比較，所含的順式作用元件類型基本相同。通過(guò)對(duì)不同長(zhǎng)度的啟動(dòng)子缺失片段進(jìn)行煙草瞬時(shí)表達(dá)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)-1302bp至-958bp和-592bp至-315bp處序列被缺失，GUS表達(dá)量增加，說(shuō)明這兩處存在著反式作用因子結(jié)合部位，將其缺失掉后，這種抑制被打破。此外，TATA-box的替代機(jī)制可能存在于