玉米CCR基因啟動子的克隆與功能分析.pdf

1、基因工程中能否使外源基因以一定的表達量在特定的組織部位表達是一個重要問題，而啟動子作為能夠調(diào)控外源基因在特定組織器官表達的分子元件之一，具有重要的研究意義。目前人們普遍使用的是組成型啟動子，這類啟動子能驅(qū)動外源基因在植物中各部位高效的表達，但同時也造成了營養(yǎng)的不必要浪費以及植物細胞的過度負荷。特異性啟動子可以通過調(diào)控目的基因使其在特定的組織部位表達。因此，對玉米中特異性啟動子的研究不僅對改善玉米的品質(zhì)具有重要意義，而且為基因工程中調(diào)控元

2、件的研究提供了參考。
　　本課題在生物信息學的分析結(jié)果的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了玉米CCR基因啟動子以及其篩檢片段的表達載體，通過農(nóng)桿菌介導法獲得轉(zhuǎn)基因的水稻植株，并對其表達特性進行了分析，獲得如下主要研究結(jié)果：
　　1.通過啟動子序列分析的相關(guān)網(wǎng)站結(jié)果顯示，該啟動子除了基本順式作用元件TATA-box和CAAT-box外，還含有四種誘導型元件：ARE、Box-W1、CGTCA-motif和 MBS；四種光應(yīng)答元件 Box4、Box

3、I、G-box和 Sp1；三種器官表達元件ROOTMOTIFTAPOX1、POLLEN1LELAT52和Skn-1。
　　2.從玉米基因組中分離出一段2145bp的肉桂酰輔酶 A還原酶（cinnamoyl-CoA reductase）基因啟動子，將其命名為pCCR。通過5’端缺失法對CCR基因啟動子的全長進行片段篩檢，得到三個不同長度的篩檢片段我們分別將其命名為 pCCR-1、pCCR-2以及pCCR-3，其片段大小分別為1650

4、 bp、1126 bp以及548 bp。通過雙酶切的方法將這四個啟動子片段與含有GUS報告基因的雙元表達載體pCAMBIA1301連接，構(gòu)建四個新型表達載體。
　　3.將構(gòu)建的四個新型表達載體運用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)入水稻中花11中，共獲得42株轉(zhuǎn)基因植株苗，其中CCR有11株，CCR-1有13株，CCR-2有8株，CCR-3有10株。通過PCR及潮霉素檢測后，共有27株為陽性植株。
　　4.采用GUS組織化學染色方法，結(jié)果顯示C