遼寧堿蓬BADH基因啟動子功能分析.pdf

1、甜菜堿醛脫氫酶(BADH)是合成甜菜堿的關(guān)鍵酶，甜菜堿是一種非毒性的滲透調(diào)節(jié)劑，在植物耐鹽中起著重要的作用。BADH基因受鹽誘導表達，隨著環(huán)境中鹽濃度的提高，BADH基因表達量增加。該基因的誘導表達特性一定與其啟動子有關(guān)。本文對遼寧堿蓬BADH基因啟動子進行了研究。研究BADH基因啟動子對分析BADH基因表達調(diào)控機制具有一定的理論意義，獲得鹽誘導啟動子區(qū)段，應(yīng)用于植物基因工程，對提高轉(zhuǎn)基因植物的耐鹽性具有重要的應(yīng)用價值。 本研究

2、利用PLACE和PlantCARE軟件對已獲得的遼寧堿蓬BADH基因啟動子序列(1993bp)進行分析，發(fā)現(xiàn)該序列具有啟動子的基本組成元件TATA-box、CAAT-box，包含多個脅迫誘導元件，如3個鹽誘導元件GT-1 motifs(GAAAAA)，6個缺水、脫落酸、抗凍、抗寒元件MYC識別位點(CANNTG)，9個傷害誘導元件WUN-motifs(ANATTNCNN)，11個熱激元件HSE(ATAAATGT)等。 根據(jù)該啟動

3、子序列設(shè)計5個正向引物分別與1個反向引物配對，PCR擴增獲得了BADH基因起始密碼子上游不同長度啟動子片段：P1(-1993～+62bp)、P2(-1466～+62bp)、P3(-1084～+62bp)、P4(-573～+62bp)、P5(-300～+62bp)。通過酶切、純化、連接，各啟動子片段定向插入pCAMBIA1301載體中，取代原有的CaMV 35S啟動子，與GUS報告基因連接，構(gòu)建了5個植物表達載體：pCAMBIA1301-

4、P1、pCAMBIA1301-P2、pCAMBIA1301-P3、pCAMBIA1301-P4、pCAMBIA1301-P5。 5個植物表達載體經(jīng)農(nóng)桿菌介導的葉盤轉(zhuǎn)化法分別轉(zhuǎn)到煙草中，篩選出潮霉素抗性的轉(zhuǎn)基因煙草陽性植株，經(jīng)PCR檢測、GUS檢測獲得陽性植株，表明各啟動子片段已轉(zhuǎn)入煙草中，且能驅(qū)動GUS基因的表達。 用不同濃度NaCl處理轉(zhuǎn)基因煙草陽性植株48h后，GUS組織化學分析和GUS熒光定量分析，結(jié)果表明：隨著鹽