基因突變技術提高phyA植酸酶在畢赤酵母中表達量及熱穩(wěn)定性的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究在對本課題組已注冊的植酸酶phyA基因核苷酸序列及氨基酸序列分析的基礎上，通過對phyA基因進行同義突變、定點突變以及結構延伸突變，獲得在畢赤酵母中高效表達并且熱穩(wěn)定性良好的植酸酶，其結果主要如下：　　1、對來源于本課題組自主分離的黑曲霉N25(AspergillusnigerChinaStrain)的植酸酶基因phyA(GenBank：基因注冊號為AF218813，蛋白質序列號為AAF25481)進行PCR介導的定點突變?！?/p>

2、　2、采用反向長距離PCR技術對上述重組酵母pp-Npm-8的植酸酶突變基因phyAm進行PCR介導的定點突變，即將植酸酶43位的苯丙氨酸替換為酪氨酸(F43Y)，將其354，358位的異亮氨酸、亮氨酸分別替換為甲硫氨酸和苯丙氨酸(I354M,L358F)，得到了兩個突變體pp-Npm-1(F43Y)及pp-Npm-2(I354M,L358F)?！　?、將上述重組酵母pp-Npm-8的植酸酶突變基因phyAm重組于大腸桿菌表達載體pE

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