HDL和辛伐他汀對人臍靜脈內皮細胞NADPH氧化酶表達和活性氧生成的影響.pdf

1、研究背景:尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NADPH氧化酶,NOX)是由多個亞基組成的酶復合體,包含胞膜成分細胞色素b558(gp91phox和p22phox)和胞漿成分p47phox、p67phox及Rac(小的GTP結合蛋白)五個亞組分。gp91phox(有NADPH、heme、FAD的潛在結合位點)和p22phox是NADPH

2、氧化酶的酶促核心,它們受胞漿成分p47phox、p67phox及Rac的調節(jié)。近幾年的研究發(fā)現(xiàn),在各種組織中存在著5種NOX的同功酶,分別稱為NOX1、NOX2、NOX3、NOX4、NOX5,其中NOX2和NOX4均在血管內皮細胞中表達,但NOX4表達水平比NOX2高20倍。進一步的研究表明,血管內皮細胞產生的活性氧(reactive oxygen species,ROS)主要來源于NOX4。我們的研究證實,高濃度低密度脂蛋白(low

3、density lipoprotein,LDL)通過上調NOX4的表達和增加ROS的產生引起內皮細胞凋亡,提示由高濃度LDL引起的氧化應激在動脈粥樣硬化的發(fā)病機制中起重要作用。令人感興趣的是,拮抗動脈粥樣硬化的保護性因素高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)和降脂的他汀類藥物近年來已被證實具有抗氧化的作用,但它們的抗氧化機制尚不清楚。本研究首先用HDL及其主要載脂蛋白apoAI和辛伐他汀預處理人臍靜脈內

4、皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),再加入高濃度LDL觀察NOX各亞基表達及ROS生成的變化,探討HDL和辛伐他汀的抗氧化機制。
　　目的:分析HUVEC中NOX各亞基的表達;分析HDL及其主要載脂蛋白apoAI與辛伐他汀對HUVEC內NOX4、NOX2、p67phox、p22phox和Rac表達及ROS生成的影響,研究HDL、apoAI和辛伐他汀對LDL的拮抗作用。

5、
　　方法:用Ⅱ型膠原酶消化法分離培養(yǎng)HUVEC;用人髓系白血病細胞株U937作為檢測p47phox、p67phox、p22phox和Rac mRNA表達的陽性對照,用RT-PCR檢測HUVEC中p47phox、p67phox、p22phox和Rac mRNA表達;用RT-PCR,Western-blotting觀察NOX4、NOX2表達的變化;用免疫熒光檢測HUVEC中p67phox和p22phox蛋白的表達變化;用流式細胞儀檢

6、測細胞內ROS的變化。
　　結果:HUVEC中表達p67phox、p22phox和Rac mRNA,不表達p47phox mRNA;HDL處理HUVEC能下調NOX4、NOX2、p67phox mRNA和蛋白水平,但HDL不影響p22phox和Rac的表達;辛伐他汀處理HUVEC能下調NOX4、p22phox、p67phox mRNA和蛋白水平,但辛伐他汀不影響NOX2和Rac的表達。用HDL預處理再加高濃度LDL刺激時,NOX4

7、和p67phox表達下調,不影響p22phox、NOX2和Rac的表達,ROS生成量減少;用apoAI預處理再加高濃度LDL刺激時,NOX4表達下調,ROS生成量減少;用辛伐他汀預處理再加高濃度LDL刺激時,NOX4、p67phox和p22phox表達下調,NOX2和Rac的表達沒有變化,ROS生成量減少。高濃度LDL刺激HUVEC時,NOX4表達上調,但NOX2、Rac、p22phox和p67phox的表達沒有明顯變化,細胞內ROS生

8、成增加。
　　結論:
　　(1) HUVEC中表達NOX亞單位p67phox、p22phox和Rac mRNA,但不表達p47phox mRNA；
　　(2) HDL、apoAI和辛伐他汀可下調HUVEC NOX4表達,降低ROS水平;HDL可下調NOX2表達,但辛伐他汀不影響NOX2表達;
　　(3) HDL可下調HUVEC p67phox表達,而辛伐他汀可下調HUVEC p67phox、p22phox mRN