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1、目的:研究糖基化終產(chǎn)物(AGEs)對(duì)內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的活性及其蛋白表達(dá)的影響.方法:用糖孵育法制備糖基化修飾的牛血清白蛋白(AGE-BSA),用膠原酶法分離培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs).將內(nèi)皮細(xì)胞與不同濃度的AGE-BSA在體外共同孵育不同時(shí)間,用同位素二步色譜法檢測(cè)基礎(chǔ)狀態(tài)下以及組胺刺激后的eNOS活性,用蛋白免疫印跡法(Western-blotting)檢測(cè)eNOS蛋白表達(dá)水平.結(jié)果:(1)基礎(chǔ)狀態(tài)下,HUVE
2、Cs的eNOS有部分激活,組胺刺激后的eNOS活性顯著增加.(2)AGE-BSA顯著抑制基礎(chǔ)狀態(tài)下的eNOS活性和組胺刺激后的eNOS活性增高,這種抑制作用呈時(shí)間、濃度依賴性.(3)AGE-BSA與HUVECs共同孵育24小時(shí)后的eNOS表達(dá)水平顯著降低(P<0.001),且隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng),eNOS表達(dá)水平進(jìn)一步降低(P<0.05,48h vs 24h),這種抑制作用與AGE-BSA的濃度有關(guān).結(jié)論:AGE-BSA顯著抑制eNOS基
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