組織因子對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞MCP-1表達(dá)的影響.pdf

1、背景:
　　 動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是一種發(fā)生在全身動(dòng)脈管壁的血管病理性重塑過程，它是眾多心腦血管疾病的發(fā)病基礎(chǔ)。AS形成的重要始動(dòng)環(huán)節(jié)是內(nèi)皮細(xì)胞損傷。內(nèi)皮細(xì)胞在特定條件下，如氧化型低密度脂蛋白刺激下，可以合成單核細(xì)胞趨化因子。受趨化的單核細(xì)胞通過其表面分子與內(nèi)皮細(xì)胞上相關(guān)受體結(jié)合。隨后，單核細(xì)胞在單核細(xì)胞趨化因子及其他趨化蛋白作用下遷入動(dòng)脈內(nèi)壁，分化形成巨噬細(xì)胞，吞噬脂質(zhì)，使得脂質(zhì)在巨噬細(xì)胞內(nèi)大量

2、蓄積。巨噬細(xì)胞遂轉(zhuǎn)變成富含膽固醇的巨噬泡沫細(xì)胞，這是脂紋形成的標(biāo)志，也是AS開始的標(biāo)志。由此可見，單核/巨噬細(xì)胞系統(tǒng)在AS的形成過程中的重要作用。
　　 脂紋中的巨噬細(xì)胞有許多功能變化，AS斑塊原位雜交分析表明，巨噬細(xì)胞內(nèi)含有編碼組織因子、載脂蛋白E、轉(zhuǎn)化生長因子-β與腫瘤壞死因子的mRNA。巨噬細(xì)胞合成的細(xì)胞因子，可作為炎癥及免疫反應(yīng)的蛋白介質(zhì)，以自分泌或旁分泌方式參與白細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞間的信息傳遞。而病變區(qū)巨噬

3、細(xì)胞的許多功能又是由單核/巨噬細(xì)胞趨化因子來調(diào)節(jié)。因此，可以說單核/巨噬細(xì)胞趨化因子及由其控制的巨噬細(xì)胞功能顯著地影響著AS病變發(fā)生和發(fā)展。
　　 趨化因子按結(jié)構(gòu)、功能和遺傳特性的不同可分為4個(gè)亞家族即C-C、C-X-C、C和CX，與單核/巨噬細(xì)胞關(guān)系密切的是C-C亞家族，包括MCP-1～5、MIP-1、RANTES等，其中單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1，MCP-1)在動(dòng)脈粥樣

4、硬化病理過程中發(fā)揮重要作用。MCP-1是1條由76個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的蛋白單鏈，是強(qiáng)作用的單核/巨噬細(xì)胞趨化因子之一。目前已知構(gòu)成動(dòng)脈粥樣硬化病變的3種主要細(xì)胞是單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞，這些細(xì)胞均與炎癥因子MCP-1密切相關(guān)，MCP-1特異地作用于血液單核細(xì)胞，招引其遷入內(nèi)皮下間隙，構(gòu)成了動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的重要機(jī)制。MCP-1參與趨動(dòng)巨噬細(xì)胞向動(dòng)脈粥樣硬化斑塊遷移，增強(qiáng)了免疫炎癥反應(yīng)，并能誘導(dǎo)組織因子(Tissue factor，

5、TF)的表達(dá)，在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊及血栓的形成中發(fā)揮了巨大的作用。
　　 當(dāng)MCP-1誘導(dǎo)單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞TF表達(dá)增加時(shí)，其將可能導(dǎo)致災(zāi)難性的結(jié)果。因?yàn)門F是凝血系統(tǒng)中唯一在細(xì)胞表面表達(dá)的跨膜糖蛋白，是機(jī)體內(nèi)活性最強(qiáng)的促凝物質(zhì)之一。國外學(xué)者推測，炎癥和凝血在TF的連接作用下，互相激活、互相促進(jìn)，可形成炎癥-凝血-血栓循環(huán)，該循環(huán)可能在AS引起的冠心病(coronary heart disease，CHD)發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

6、因?yàn)锳S是CHD的重要發(fā)病基礎(chǔ)，TF在CHD的炎癥-凝血-血栓循環(huán)中具有重要作用，所以進(jìn)一步研究TF在AS病理性過程中的作用機(jī)制對(duì)于進(jìn)一步揭示CHD的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的主要細(xì)胞成分均能生成TF。而TF在AS的發(fā)生、發(fā)展中可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和血管平滑肌細(xì)胞增生。這說明動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中主要細(xì)胞成分(血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞)與TF之間存在相互作用。單核細(xì)胞作為動(dòng)脈粥

7、樣硬化斑塊中主要細(xì)胞成分之一，了解其與TF之間的相互作用關(guān)系對(duì)于進(jìn)一步揭示CHD的發(fā)病機(jī)理具有重要意義。
　　 現(xiàn)已知MCP-1對(duì)單核/巨噬細(xì)胞趨化與聚集具有重要作用。MCP-1參與趨動(dòng)單核/巨噬細(xì)胞向動(dòng)脈粥樣硬化斑塊遷移，增強(qiáng)了免疫炎癥反應(yīng)，并能誘導(dǎo)TF的表達(dá)，在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊及血栓的形成中發(fā)揮了重要作用。MCP-1、TF表達(dá)的測定或許可以反映動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性。因此，研究MCP-1、TF在冠心病患者血漿中表達(dá)的意義以

8、及TF與MCP-1之間的關(guān)系，對(duì)于進(jìn)一步研究TF與單核細(xì)胞之間的相互作用，以及更深刻地揭示TF和MCP-1在AS的病理過程和炎癥-凝血-血栓循環(huán)中的作用具有重要意義。
　　 第一章冠心病患者血漿中MCP-1、TF的意義
　　 目的:
　　 1、觀察患者血漿中MCP-1、TF的濃度，探討其在冠心病中的意義及臨床價(jià)值。
　　 2、觀察患者血漿中MCP-1與TF的關(guān)系。
　　 方法:
　　 連續(xù)

9、入選2010年1月—2011年6月期間在南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院心內(nèi)科住院的122例患者，排除既往心力衰竭病史、肺梗塞、心包炎、心肌炎、心肌病、主動(dòng)脈夾層、周圍血管病、腦血管病、急慢性炎癥、免疫及結(jié)締組織疾病、發(fā)熱、甲亢、貧血等繼發(fā)引起心絞痛癥狀者。非冠心病患者30例，冠心病患者92例(其中穩(wěn)定型心絞痛患者32例、不穩(wěn)定型心絞痛患者27例、急性心肌梗死患者33例)。入院后完善相關(guān)檢查，酶聯(lián)免疫吸附法測定血漿中MCP-1、TF濃度，采用SPS

10、S13.0分析軟件分析數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)采用(x)±S表示，兩組間比較用獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn)，多組比較用One-Way ANOVA(方差齊時(shí)多重比較用LSD法和Bonferroni法;方差不齊時(shí)，用Welch法或Brown-Forsythe法，組間多重比較用Dunnett T3法和Dunnett C法)，判斷兩個(gè)變量的相關(guān)關(guān)系用偏相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、在NCHD組、SAP組、UAP組、

11、AMI組患者血漿中MCP-1、TF的濃度均有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 2、NCHD組患者血漿中cTnI、CK-MB、MCP-1、TF的濃度均低于CHD組(均P＜0.05)。
　　 3、患者血漿中MCP-1濃度和TF濃度呈正相關(guān)，兩者的相關(guān)系數(shù)是0.278(P=0.012，P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、患者血漿中MCP-1、TF的濃度在冠心病中有一定的臨床意義。
　　 2、患者

12、血漿中TF的濃度與MCP-1的濃度具有相關(guān)性，MCP-1可能在冠心病的炎癥-凝血-血栓循環(huán)中具有重要作用。
　　 第二章組織因子對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 MCP-1表達(dá)的影響
　　 目的:
　　 通過觀察不同濃度組織因子(TF)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)表達(dá)的影響，探討TF對(duì)MCP-1表達(dá)的影響及可能機(jī)制。
　　 方法:
　　 體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，分為對(duì)照組及10ng/L

13、、100ng/L、103ng/L、104ng/L的組織因子處理組，對(duì)照組加入生理鹽水，4個(gè)處理組分別加入相應(yīng)濃度的組織因子，分別采用ELLSA法和RT-PCR法檢測人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞MCP-1和MCP-1mRNA的表達(dá)。采用SPSS13.0分析軟件分析數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)采用(x)±S表示，多組間比較用One-Way ANOVA(方差齊時(shí)用ANOVA法，組間多重比較用LSD法和Bonferroni法;方差不齊時(shí)，用Welch法和Brown-Fors

14、ythe法，組間多重比較用Dunnett T3法和Dunnett C法)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.ELLSA的檢測結(jié)果顯示:各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞均有MCP-1表達(dá)。對(duì)照組的MCP-1表達(dá)水平與4個(gè)組織因子處理組相比較均有顯著性差異(均P＜0.05)。4個(gè)組織因子處理組間的MCP-1表達(dá)水平相互比較均有顯著性差異(均P＜0.05)。在一定濃度范圍內(nèi)，組織因子呈濃度依賴性地促進(jìn)體外培養(yǎng)的人

15、臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞MCP-1的表達(dá)。
　　 2.RT-PCR的檢測結(jié)果顯示:各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞均有MCP-1mRNA表達(dá)。對(duì)照組的MCP-1mRNA表達(dá)水平與4個(gè)組織因子處理組相比較均有顯著性差異(均P＜0.05)。4個(gè)組織因子處理組間的MCP-1mRNA表達(dá)水平相互比較均有顯著性差異(均P＜0.05)。在一定濃度范圍內(nèi)，組織因子呈濃度依賴性地促進(jìn)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞MCP-1mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　

16、　 在一定濃度范圍內(nèi)，組織因子呈濃度依賴性的促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞單核細(xì)胞趨化蛋白-1的表達(dá)。其可能在動(dòng)脈粥樣硬化的病理過程中發(fā)揮重要作用
　　 第三章組織因子對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞—單核細(xì)胞粘附反應(yīng)的影響
　　 目的:
　　 通過觀察組織因子對(duì)體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞—單核細(xì)胞粘附反應(yīng)的影響，探討組織因子在動(dòng)脈粥樣硬化病理性過程中的作用機(jī)制
　　 方法:
　　 體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，分5組(分別

17、為不加 TF組、10ng/1TF組、100ng/1TF組、103ng/1TF組和104ng/1TF組)，單核細(xì)胞組內(nèi)不加人臍內(nèi)皮細(xì)胞，按步驟分別加入單核細(xì)胞和相應(yīng)濃度的組織因子培養(yǎng)液，37℃溫育12h，顯微鏡觀察各組內(nèi)皮細(xì)胞的單核細(xì)胞粘附情況。PBS清洗3次，洗去未粘附的單核細(xì)胞，以6mol/L的NaOH溶液室溫下溶解細(xì)胞。Lowry法檢測細(xì)胞溶解液內(nèi)蛋白含量，根據(jù)公式(粘附率(％)＝TF實(shí)驗(yàn)組蛋白含量—不加TF組蛋白含量均值/單核細(xì)胞

18、組蛋白含量均值×100％)算出各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞—單核細(xì)胞粘附率。采用SPSS13.0分析軟件分析數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)采用(x)±S表示，多組間比較用One-Way ANOVA(方差齊時(shí)用ANOVA法，組間多重比較用LSD法和Bonferroni法;方差不齊時(shí)，用Welch法和Brown-Forsythe法，組間多重比較用Dunnett T3法和Dunnett C法)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 各組