白介素-6對人髓核細胞基質(zhì)金屬蛋白酶-3和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1表達的影響.pdf

1、背景：腰腿痛是一種常見病，已嚴重影響人們的正常生活，腰椎間盤突出是腰腿痛最常見的原因之一。機械壓迫是導致疼痛的直接因素，然而在臨床工作中我們有時會發(fā)現(xiàn)患者的臨床表現(xiàn)與影像學檢查不符，突出的程度及其對神經(jīng)根的壓迫程度與臨床癥狀不相一致，手術(shù)中發(fā)現(xiàn)神經(jīng)根充血水腫，類似炎癥樣改變。所以，僅用機械壓迫因素來解釋腰腿痛的發(fā)病機制還遠遠不夠，炎癥因素在椎間盤退變中的作用越來越引起大家的關(guān)注。這一事實也說明，目前椎間盤退變性疾病的治療仍存在許多問題，

2、需要繼續(xù)深入地研究和探索。近幾年來，有人報道在退變椎間盤中發(fā)現(xiàn)炎癥細胞因子，故推測椎間盤退變與致炎因子密切相關(guān)。但是，這些炎癥細胞因子在椎間盤退變中的確切作用還不清楚。
　　 目的：通過對人髓核細胞體外培養(yǎng)，觀察炎癥因子白細胞介素-6(IL-6)對髓核細胞基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)及基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)表達的影響，以期進一步闡明IL-6介導基質(zhì)金屬蛋白酶在椎間盤細胞退行性變中的病理機制，從而為椎間盤

3、退變的防治提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法：1、分離并消化人椎間盤髓核組織得到單個細胞并完成原代細胞接種培養(yǎng)。2、采用HE染色法定時于倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、增殖的變化，采用免疫細胞化學染色法檢測Ⅱ型膠原的表達情況。3、在原代細胞融合傳代至第三代后建立空白對照組與實驗組(施加10μg/L,100μg/L,1000μg/L不同濃度白細胞介素-6刺激細胞生長。4、采用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法測定各組髓核細胞MM

4、P-3及TIMP-1 mRNA的表達變化。5、經(jīng)統(tǒng)計軟件分析得出結(jié)論。
　　 結(jié)果：1、在倒置相差顯微鏡下連續(xù)觀察，10天后95％以上的細胞貼壁，原代細胞多為梭形，有偽足伸出；經(jīng)胰酶消化傳代后，細胞貼壁生長速度加快。2、HE染色細胞多為梭形，有偽足伸出，細胞核為圓形或橢圓形，胞漿內(nèi)可見較多空泡；Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色呈現(xiàn)陽性結(jié)果。3、應用不同濃度的IL-6(0、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)刺激體外培養(yǎng)

5、的人髓核細胞，共同培養(yǎng)72h后收集細胞。應用RT-PCR方法檢測MMP-3和TIMP-1的表達情況，經(jīng)過方差分析檢驗可知，F(xiàn)值分別為26.360、86.790，P值均等于0.000，說明四組之間比較差異具有顯著性。在不同劑量IL-6的刺激下，MMP-3的表達量在實驗劑量范圍內(nèi)隨著IL-6的劑量加大而呈上升趨勢，TIMP-1的表達量在實驗劑量范圍內(nèi)隨著IL-6的劑量加大而呈下降趨勢。四組之間兩兩比較得出，對照組、10μg/L組、100μg