基質金屬蛋白酶抑制劑的篩選研究.pdf

1、[目的]從4種候選的藥物中初步篩選出抑制基質金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)表達和活性的藥物，為進一步復篩和抗腫瘤轉移作用研究打下基礎。 [方法]體外培養(yǎng)高轉移性B16黑色素瘤細胞(正常內(nèi)皮細胞作為平行對照)，加不同濃度的待檢藥物，利用MTT方法檢測藥物對細胞生長的抑制作用，用ELISA方法檢測藥物對細胞培養(yǎng)上清中MMP-2分泌量的影響，同時觀察細胞形態(tài)學的變化，再用免疫細胞化學的方法檢測

2、藥物對細胞內(nèi)的MMP-2和MMP-9蛋白表達的影響，使用明膠酶譜法檢測細胞培養(yǎng)上清中MMP-2的活性，通過RT-PCR的方法檢測藥物對細胞MMP-2mRNA的表達的作用。 [結果]MTT法檢測顯示：3種濃度的利凡諾在72小時內(nèi)對B16細胞都有明顯抑制，與同時段對照組相比較均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；抑制率最高達63.04％；4種濃度的康復新在72小時內(nèi)對細胞都有微弱的抑制，與同時段對照組相比較均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；

3、不同濃度的B110和G210藥物血清對B16細胞有生長抑制作用，并且在實驗的最初24小時是抑制作用表現(xiàn)最明顯的時間段。ELISA法檢測顯示：利凡諾、康復新使B16細胞培養(yǎng)上清中MMP-2蛋白的相對含量均降低，但是康復新作用較弱；B110和G210藥物血清亦降低培養(yǎng)上清中MMP-2蛋白的相對含量，且在實驗的最初24小時也是作用最明顯的時段。細胞形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn)：利凡諾作用后，B16黑色素瘤細胞出現(xiàn)分化成熟的形態(tài)學改變，但對正常細胞的形態(tài)卻沒

4、有明顯的影響，其它藥物無類似效應。免疫細胞化學方法查見：利凡諾降低細胞內(nèi)MMP-2、MMP-9蛋白表達。明膠酶譜法檢測顯示：在等體積的細胞上清檢測時伴隨著藥物濃度的增加，MMP-2的蛋白活性漸漸減弱；等細胞數(shù)的相應培養(yǎng)上清檢測MMP-2的蛋白活性未表現(xiàn)出類似趨勢。RT-PCR檢測顯示：在利凡諾的作用下，伴隨著藥物濃度的升高，MMP-2mRNA表達逐漸降低。 [結論]幾種藥物均有抑制MMP-2表達作用，但利凡諾作用最明顯。利凡諾對