白介素-1β誘導人椎間盤髓核細胞表達基質(zhì)金屬蛋白酶的實驗研究.pdf

1、下腰痛(Low back pain，LBP)是40歲以上人群的常發(fā)病，據(jù)估計70％的人一生中都會經(jīng)歷下腰痛，其中腰椎間盤退變性疾病(degenerative disc disease，DDD)是最為重要的原因。椎間盤退變的病因尚未完全明了，年齡、遺傳、環(huán)境、精神、機械應力、吸煙等因素可能都發(fā)揮了作用。隨著椎間盤含水量的下降，髓核纖維化，椎間盤處于代謝失衡狀態(tài)，大量炎性因子產(chǎn)生，椎間盤細胞的合成能力下降，基質(zhì)分解變強是退變椎間盤共同的特征

2、。目前研究表明椎間盤退變是各種因素共同作用的結(jié)果，炎性因子白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)可以促進其他炎性因子的表達以及某些基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)表達。但是，目前尚沒有系統(tǒng)研究IL-1 β對基質(zhì)金屬蛋白酶表達的報道。 本課題通過培養(yǎng)人正常椎間盤髓核細胞，用不同濃度IL-1 β與髓核細胞共培養(yǎng)，RT-PCR和定量PCR檢測各種基質(zhì)金屬蛋白酶表達，提示退

3、變椎間盤炎性因子的存在可能是引起椎間盤基質(zhì)分解的主要因素之一。 第一部分：人正常椎間盤髓核細胞的培養(yǎng)和鑒定 目的：探討人正常椎間盤髓核細胞的類型。 方法：取特發(fā)性脊柱側(cè)彎患者腰椎間盤髓核組織，用膠原酶消化法消化細胞，DMEM-F12加10％胎牛血清培養(yǎng)細胞，甲苯胺藍、番紅O染色和Ⅱ型膠原免疫組化分別檢測糖胺多糖、蛋白多糖和Ⅱ型膠原表達。 結(jié)果：可以檢測到人椎間盤髓核細胞表達糖胺多糖、蛋白多糖和Ⅱ型膠原。

4、 結(jié)論：人椎間盤髓核細胞為類軟骨細胞。 第二部分： IL-1 β誘導椎間盤髓核細胞表達基質(zhì)金屬蛋白酶 目的：探討IL-1β對人椎間盤髓核細胞表達基質(zhì)金屬蛋白酶的作用。 方法：分離人椎間盤髓核細胞進行單層培養(yǎng)，分別用10ng／ml和50ng／ml重組人IL-1β與髓核細胞共培養(yǎng)48小時，并設立空白對照組，RT-PCR檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-1、2、3、7、13的表達，定量PCR檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達。

5、 結(jié)果：實驗組(10ng／ml和50ng／ml重組人IL-1β)中基質(zhì)金屬蛋白酶-1、2、3、7、9、13表達均較對照組高(p<0.05)；基質(zhì)金屬蛋白酶-9、13表達隨IL-1β濃度升高而升高(p<0.05)；在相同濃度的IL-1β(10ng／ml)下，基質(zhì)金屬蛋白酶-7、13表達升高分別約為10倍和38倍，較基質(zhì)金屬蛋白酶-1、2、3、9升高明顯(p<0.05)。 結(jié)論：IL-1β可以促進人椎間盤髓核細胞表達基質(zhì)金屬蛋白酶