乙型肝炎病毒感染慢加急性肝衰竭患者PD-1的表達(dá)研究.pdf

1、目的：
　　 乙型肝炎病毒感染慢加急性肝衰竭(HBV-associated acute-on-chronic liver fail-ure，HBV-ACLF)病情危重、發(fā)展迅速、病死率高達(dá)70～80％，是傳染病死亡的重要疾病之一。其發(fā)病機(jī)制不是十分明確。目前研究多集中于“免疫正性調(diào)控”的研究，對(duì)于負(fù)性調(diào)節(jié)分子在HBV-ACLF中的表達(dá)情況未見相關(guān)報(bào)道。本文研究了HBV- ACLF過程中患者體內(nèi)T細(xì)胞亞群上免疫共刺激負(fù)性調(diào)控分子—

2、—程序性死亡分子(Programmed death-1，PD-1)及其配體PD-L1的表達(dá)變化以及與病情預(yù)后之間的關(guān)系，試圖闡明HBV-ACLF過程中PD-1/PD-L1表達(dá)對(duì)病情的變化影響。
　　 方法：
　　 選擇60例HBV-ACLF患者、15例肝炎肝硬化乙型活動(dòng)性患者及15例健康人為研究對(duì)象(實(shí)驗(yàn)選擇的病例ALT或AST均大于正常值的兩倍)。臨床數(shù)據(jù)的收集：實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)患者的HBVDNA，收集臨床檢驗(yàn)數(shù)據(jù)：

3、血常規(guī)、肝功、凝血酶原活動(dòng)度等指標(biāo)；根據(jù)入組時(shí)病情分為早、中、晚三期，根據(jù)疾病不同轉(zhuǎn)歸分為好轉(zhuǎn)、無效、死亡。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血CD8+T細(xì)胞上相關(guān)分子：1)T淋巴細(xì)胞上的PD-1、CD28、CD95、CD45RA、CCR7；2)CD14+細(xì)胞上的PD-L1；3)CD8+細(xì)胞上的穿孔素、顆粒酶A、顆粒酶B、CD107a。應(yīng)用CBA(CytometricBead Array)試劑盒動(dòng)態(tài)檢測(cè)外周血細(xì)胞因子，包括白介素-2(interle

4、ukin-2，IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10，腫瘤壞死因子-α(tumour necrosis factor-α，TNF-α)、干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)等。取10例HBV-ACLF患者的肝臟行免疫組化染色分析，另各取10例肝炎肝硬化患者、6例健康人作為對(duì)照組。了解ACLF、肝炎肝硬化患者肝臟上CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、PD-1及其配體PD-L1的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　

5、HBV-ACLF患者CD8+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)上調(diào)(17.31％±11.28％)，較肝硬化患者(11.18％±5.38％)和健康人(5.96％±4.19％)顯著增高；根據(jù)Meld評(píng)分分組，Meld≥20分組患者PD-1陽性表達(dá)率(20.98％±12.28％)比<20分組患者(13.61％±8.23％)明顯增高，組間具有顯著性差異(P<0.05)；好轉(zhuǎn)組PD-1表達(dá)率(12.89％±7.18％)低于無效組(21.19％±11.21％)，

6、組間具有顯著性差異(P<0.05)；早期(13.27％±7.2％)、中期(18.86％±10.31％)、晚晚(29.51％±19.59％)三期PD-1表達(dá)率呈上升趨勢(shì)，組間均有顯著性差異(P<0.05)。CD14+T細(xì)胞上PD-L1在疾病早期表達(dá)低，隨著病情的加重表達(dá)成上升趨勢(shì)，早期(4.19％±3.51％)分別與中期(9.24％±6.92％)、晚期(7.05％±5.34％)有顯著性差異(P<0.05)；好轉(zhuǎn)組與死亡組有顯著性差異(P<

7、0.05)。CD8+T細(xì)胞上CD95在死亡組表達(dá)高于好轉(zhuǎn)組與無效組，但無顯著性差異。代表CD8+T細(xì)胞殺傷能力的穿孔素、顆粒酶及CD107a在死亡組表達(dá)升高，與其它組間有顯著性差異(P<0.05)，但穿孔素、顆粒酶及CD107a陽性細(xì)胞上PD-1陽性表達(dá)率非常低。隨著病情的加重致炎因子IFN-γ、TNF-α表達(dá)增多，可能促進(jìn)了PD-1的上調(diào)表達(dá)。抑炎因子IL-10無明顯變化。此外，HBV-ACLF和肝硬化者在肝組織匯管區(qū)及炎癥區(qū)PD-1