BMP-7與VEGF聯(lián)合誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的:實驗的目的在于建立體外分離、擴增培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的方法,及描述其生物學(xué)的特征。了解骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)聯(lián)合誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向軟骨細(xì)胞分化,通過深入認(rèn)識兩種細(xì)胞因子相互之間的作用,可給軟骨組織工程的種子細(xì)胞來源提供一種新的途徑。
　　方法:1)實驗采用密度梯度離心法與貼壁分離法相結(jié)合分離人 BMSCs,將分離得到的BMSCs進(jìn)行0.4％臺盼藍(lán)

2、染色,并計算細(xì)胞的活性。將得到的細(xì)胞用含15％胎牛血清的DMEM-LG普通培養(yǎng),待細(xì)胞80％以上融合后用0.25％胰蛋白酶溶液進(jìn)行消化傳代,將傳代至第四代細(xì)胞。取傳代至第四代細(xì)胞行流式細(xì)胞表面抗原 CD34/CD44/CD45/CD29/CD90鑒定。2)實驗共分四組,對照組 A組不加任何生長因子,實驗 B組加入800ng/ml VEGF,C組加入200ng/ml BMP-7,D組加入200ng/ml BMP-7+800ng/ml VE

3、GF進(jìn)行向軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng),誘導(dǎo)第21天后終止培養(yǎng),各組間行細(xì)胞增殖比較,蘇木素伊紅(HE)染色觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變、各組行 RT-PCR檢測軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原 mRNA表達(dá)水平、Western blot測定軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)水平,比較各組間差異。
　　結(jié)果:1)蘇木素伊紅(HE)染色示:A組:軟骨細(xì)胞稀疏、著色均勻、邊界清晰,以橢圓形、多角形為主,胞漿呈紫紅色,胞核呈藍(lán)色以圓形、橢圓形為主;其余 B、C、D組,軟骨細(xì)胞數(shù)量增多

4、,著色均勻、邊界清晰,以橢圓形、多角形為主,胞漿呈紫紅色,胞核呈藍(lán)色以圓形、橢圓形為主。2)在 A、B、C、D四組誘導(dǎo)培養(yǎng)21天后, RT-PCR法檢測細(xì)胞Ⅱ型膠原 mRNA的表達(dá)水平分別為0.2851±0.0102、0.3343±0.1210、0.5122±0.0937、0.7162±0.1032,各組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);Western blot測定Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)水平分別為0.3292±0.0067、0.4717±