版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、象草(Pennisetum purpureum)是一種禾本科狼尾草屬多年生草本植物,是熱帶和亞熱帶地區(qū)的重要種質資源。但植株體內高含量的木質素限制了象草的開發(fā)和利用。因此,通過基因工程的手段,對植株進行木質化遺傳改良對象草的利用具有非常重要的意義。MYB轉錄因子可以在轉錄水平上參與木質素的合成調控。本研究克隆了象草MYB轉錄因子,并且對其進行了功能分析,同時還克隆了肉桂酰輔酶A還原酶基因(Cinnamoy-CoA Reductase,C
2、CR)啟動子,分析了其表達特性,以期為象草的木質化改良工作奠定基礎。主要的研究結果如下:
(1)通過同源克隆的技術,從華南象草中克隆出一個756 bpMYB轉錄因子CDS區(qū)域,命名為PpMYB4。序列已經提交GenBank,登錄號為:KU612217。
?。?)通過軟件分析,PpMYB4含有251個氨基酸,蛋白質分子式為C1217H1954N362O356S17。總分子量為27.89KDa,理論等電點(PI)為8.81
3、。不穩(wěn)定系數是45.45,屬于不穩(wěn)定蛋白,親水性平均值(GRAVY)為-0.468,為親水性蛋白,定位于細胞核中。PpMYB4的氨基酸序列中含有2個保守的結構域,在系統進化樹中與單子葉植物R2R3-MYB轉錄因子歸為一類。
?。?)構建一個以eGFP為報告基因的亞細胞定位載體pAN580-PpMYB4,通過PEG介導法轉化象草原生質體后發(fā)現PpMYB4定位于細胞核中。
(4)構建了PpMYB4的植物過表達載體pBA-P
4、pMYB4,并且通過葉盤法轉化煙草,最終得到7株陽性轉基因株系。與野生型相比,轉基因植株生長緩慢,出現矮化、莖節(jié)變短、老葉早衰、葉形不正常等現象。轉基因煙草莖部的木質素含量與野生型植株相比顯著下降,其中OE6植株的木質素含量比野生型植株木質素含量低32.45%。該結果說明PpMYB4基因參與了木質素合成的負調控。
?。?)對轉基因植株木質素合成途徑中關鍵酶基因進行Real-time PCR檢測,發(fā)現轉基因植株的木質素合成關鍵酶基
5、因PAL、C4H、CAD、CCoAOMT、HCT的相對表達量分別為0.49、0.38、0.71、0.30、0.45,比野生型植株表達量低,且PAL、C4H和CAD表達量顯著低于野生型植株。該結果說明過量表達 PpMYB4使得植株的木質素合成關鍵酶基因的改變從而引起植株木質素含量的改變。
?。?)通過hiTAIL-PCR的方法克隆了華南象草PpCCR基因起始密碼子ATG上游1368 bp的啟動子序列。經過預測,該序列的轉錄起始位點
6、(TSS)為T,位于ATG上游261 bp處。PpCCR啟動子含有重要的順式作用元件TATA-box和CAAT-box。PpCCR啟動子的其他順式作用元件還可以分為3類。一類是對植物生長發(fā)育相關的元件,如光響應元件、分生組織表達相關的元件(CAT-box)、胚乳表達相關的元件(GCN4_motif)、植物生物鐘調控的作用元件(Circadian)。另外一類主要是對外源激素脅迫響應的元件,如 CGTCA-motif、TGACG-motif
7、為茉莉酸甲酯響應的元件,TGA-element為生長素響應的元件,motif IIb為脫落酸的響應元件。還有一類調控元件為MYB轉錄因子的識別位點。
(7)構建PpCCR啟動子-GUS表達載體并且通過葉盤法轉化煙草。對轉基因植株莖、葉柄、葉和根進行 GUS組織化學染色發(fā)現,植株葉柄的木質部和韌皮部以及莖部的維管組織細胞能被染成藍色;葉片和根部不能染成藍色。以上結果說明PpCCR啟動子是一個典型的維管組織特異型啟動子。利用200
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 馬鈴薯StERF3轉錄因子的功能分析及其啟動子的克隆.pdf
- 玉米CCR基因啟動子的克隆與功能分析.pdf
- 青蒿AaWRKY3轉錄因子的克隆及功能分析.pdf
- 荷花NnMYB4轉錄因子全長ORF克隆及功能分析.pdf
- 大豆抗逆相關轉錄因子基因GmDREB3的功能分析及啟動子的克隆.pdf
- 小麥nsLTPs基因及啟動子的克隆與功能分析.pdf
- 番茄LeNLP4轉錄因子的功能分析.pdf
- 玉米LEG基因啟動子克隆與功能分析.pdf
- 玉米WRKY基因啟動子的克隆與功能分析.pdf
- 草甘膦誘導高表達基因及啟動子的克隆和功能分析.pdf
- 玉米WUS基因啟動子的克隆及功能分析.pdf
- 花生根特異啟動子的克隆及功能分析.pdf
- 蘋果兩個MYB轉錄因子基因的克隆與功能分析.pdf
- 玉米PABS基因啟動子的克隆與功能分析.pdf
- 水稻rbcs基因啟動子的克隆、功能分析及應用.pdf
- 山核桃CcLFY基因啟動子的克隆及功能分析.pdf
- 56119.pnzip基因啟動子的克隆與功能分析
- 化學誘導啟動子的克隆、定點突變及功能分析.pdf
- 枯草芽孢桿菌啟動子的克隆及功能分析.pdf
- 大豆貯藏蛋白基因啟動子的克隆與功能分析.pdf
評論
0/150
提交評論