表達IBDV-VP2蛋白的重組禽Ⅰ型腺病毒（rFAv-VP2）的構建及純化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、禽腺病毒宿主細胞廣泛，繁殖后病毒滴度高，大多數(shù)呈隱性感染，是構建基因工程疫苗最為理想的載體之一。本實驗室何秀苗等早期從健康雞群中分離到一株無致病性的Ⅰ型禽腺病毒，并構建了禽腺病毒通用轉移載體pFAVI-CMV。本研究在此基礎上，用EcoRⅠ、NheⅠ雙酶切通用轉移載體pFAVI-CMV，通過電泳、回收載體DNA；同時，用同樣的酶切pCDNA3.1-VP2，電泳、回收VP2片段。通過連接酶連接構建成插有VP2基因的轉移載體，經(jīng)酶切分析正確

2、，命名為：pFAVI-VP2。 以Lipofectin轉染試劑將pFAVI-VP2DNA與野生型禽Ⅰ型腺病毒在雞胚腎細胞(CEK)上進行同源重組，通過間接免疫熒光試驗(IFA)進行檢測，結果獲得一株表達傳染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因的重組禽Ⅰ型腺病毒，命名為：rFAVI-VP2。以梯度稀釋和雙層瓊脂覆蓋兩種方法對重組病毒進行純化，通過IFA方法進行檢測，結果獲得了純化的rFAVI-VP2。用抗VP2特異性單克隆抗體建立

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