人腸道病毒71型衣殼蛋白VP1、VP2、VP3、VP4的構(gòu)建、表達(dá)及抗原性研究.pdf

1、人腸道病毒71型(EV71)屬于小RNA病毒科、腸道病毒屬的成員，是手足口病的主要病原體。手足口病和中樞神經(jīng)感染是EV71病毒感染引起的兩大常見(jiàn)臨床癥狀。目前針對(duì)EV71病毒感染的治療還沒(méi)有特異和高效的藥物，也沒(méi)有預(yù)防性疫苗上市。滅活疫苗的研究還處于Ⅰ期臨床試驗(yàn)階段；基因工程重組蛋白疫苗尚處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，需要尋找好的有效抗原蛋白。因此，本論文在原核表達(dá)系統(tǒng)E.coli中高效表達(dá)了EV71四種衣殼蛋白：VP1、VP2、VP3、VP4，表

2、達(dá)產(chǎn)物均以包涵體形式存在；包涵體經(jīng)過(guò)純化、復(fù)性后的SDS-PAGE電泳純度平均達(dá)到90％以上。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示VP1、VP4蛋白具有良好的免疫原性，產(chǎn)生高抗體滴度；VP2、VP3無(wú)明顯的免疫原性，沒(méi)有檢測(cè)到抗體滴度；僅VP1免疫血清具有中和活性。通過(guò)本論文實(shí)驗(yàn)，加深了對(duì)EV71四種衣殼蛋白的認(rèn)識(shí)；證實(shí)了VP4因?yàn)闆](méi)有產(chǎn)生中和抗體，不具有成為基因工程重組蛋白疫苗候選抗原的潛力。同時(shí)證實(shí)了原核表達(dá)的VP2、VP3抗原蛋白經(jīng)過(guò)去變性劑初步復(fù)性