表達IBDV VP2蛋白的重組火雞皰疹病毒疫苗的構建及其免疫效力試驗.pdf

1、傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectiousbursal disease virus，IBDV)引起的雛雞急性、高度接觸性疾病。IBDV的感染對雛雞的法氏囊造成損傷，從而導致免疫抑制，增加了機體對其他疾病的易感性。為了克服弱毒活疫苗和中等毒力活疫苗的缺陷，本研究通過在火雞皰疹病毒(HVT) FC126毒株的US2復制非必需區(qū)，插入IBDV超強毒株的VP2基因，構

2、建表達VP2蛋白的重組HVT疫苗毒株，旨在為研制預防IBD和馬立克氏病(MD)的二聯基因工程疫苗打下基礎。
　　本研究以IBDV XD2010超強毒株為模板，通過RT-PCR擴增其VP2基因，利用HVTFC126疫苗株基因組US2同源序列、CMV啟動子和綠色熒光蛋白(EGFP)基因，構建含有VP2基因的轉移載體質粒pCMV-EGFP-VP2，以磷酸鈣沉淀法將轉移載體質粒和HVTFC126基因組DNA共同轉染雞胚成纖維細胞(CEF)

3、，通過篩選、純化得到帶EGFP標志的重組病毒rHVT-EGFP-VP2。利用Cre重組酶去除rHVT-EGFP-VP2基因組中的EGFP基因，重新轉染CEF細胞，經篩選、純化得到不含EGFP基因的重組病毒rHVT-VP2。經PCR、間接免疫熒光(IFA)和western blot鑒定，重組病毒rHVT-VP2可正確表達VP2蛋白。
　　在重組病毒rHVT-VP2對IBDV超強毒株的免疫保護試驗中，設立rHVT-VP2疫苗組、中等毒

4、力疫苗組(N87)、空白對照組和攻毒對照組，從各試驗組免疫后的法氏囊重量/體重（囊體比）的變化、發(fā)病率、死亡率、攻毒后的增重、抗體水平等方面進行免疫保護效力的評價。結果發(fā)現，rHVT-VP2組免疫后法氏囊正常，而N87疫苗組免疫后法氏囊發(fā)生了萎縮;rHVT-VP2組及N87疫苗組攻毒后的發(fā)病率、死亡率與攻毒對照組相比差異極顯著;攻毒后rHVT-VP2組體重增重顯著高于N87疫苗組;利用本研究所建立的間接ELISA方法檢測IBDV抗體，發(fā)

5、現rHVT-VP2能夠誘導機體產生較高水平的特異性抗體，并在一定時間內持續(xù)升高，抗體水平明顯高于N87疫苗組;結合各組臨床癥狀及器官病理變化，得出結論:重組病毒rHVT-VP2有效抵抗IBDV超強毒株的攻擊，且免疫保護效力高于N87疫苗組。
　　重組病毒rHVT-VP2對MDV的免疫保護試驗中，rHVT-VP2組對MD保護率和HVTFC126疫苗組保護率相當，證明重組病毒rHVT-VP2能使機體產生較高的免疫保護力，足以抵抗MDV