Smad-4靶向基因干預(yù)對胰腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的作用研究.pdf

1、背景:胰腺癌是重要的消化道惡性腫瘤之一,其早期診斷和臨床治療都堪稱棘手。臨床實(shí)踐表明,對于胰腺癌的治療,單純手術(shù)的治療效果是有限的,同時(shí)由于腫瘤耐藥性的產(chǎn)生,化療的治療效果也不佳。為了提高胰腺癌患者的生存率,迫切需要研究新的有效療法如介入治療和基因治療。對胰腺癌發(fā)病機(jī)理及其生物學(xué)特性的進(jìn)一步闡明將有助于發(fā)現(xiàn)新型的分子水平的靶向治療藥物,制定新的治療方案,最終提高胰腺癌治療效果。Smad-4/DPC-4是胰腺癌發(fā)生的較特異的腫瘤抑制基因。

2、目前研究發(fā)現(xiàn):(1)該基因純合性缺失或突變可導(dǎo)致TGF-β/Smad-4信號傳導(dǎo)通路缺陷;(2)腫瘤細(xì)胞可能通過Smad-4突變抵抗化療誘發(fā)的細(xì)胞凋亡;(3)Smad-4/DPC-4可通過誘導(dǎo)p21waf1表達(dá),并通過抑制細(xì)胞周期進(jìn)展而抑制腫瘤細(xì)胞生長?；赟mad-4/DPC-4在胰腺癌生物學(xué)行為中的重要性,本實(shí)驗(yàn)在細(xì)胞水平及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)水平評價(jià)了Smad-4基因干預(yù)對胰腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的作用。研究結(jié)果對應(yīng)用Smad-4/DPC-4靶向

3、基因治療胰腺腫瘤,最終延長患者的生存期有重要意義。目的:Smad-4基因?yàn)橐认侔┨禺惖哪[瘤抑制基因,屬于轉(zhuǎn)化生長因子β超家族。其基因的缺失、突變可導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖,在胰腺癌發(fā)生,發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。本研究利用Smad-4基因缺陷細(xì)胞株、Smad-4穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株以及對照細(xì)胞株,在細(xì)胞水平及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)水平研究了Smad-4對胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)理。方法:不同濃度(0～30μM)的吉西他濱作用于人類胰腺癌細(xì)胞株CFPAC

4、-1(野生型)、CFPAC-1(穩(wěn)定表達(dá)Smad4)[DPC-4型]、CFPAC-1(穩(wěn)定表達(dá)空白載體)[TJM型],選用不同實(shí)驗(yàn)方法觀察形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)特性的改變。四唑鹽比色實(shí)驗(yàn)(MTT方法)觀察不同濃度吉西他濱對3種細(xì)胞株增殖的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測藥物誘導(dǎo)下3種細(xì)胞株的凋亡情況;劃痕實(shí)驗(yàn)觀察吉西他濱對3種胰腺癌細(xì)胞株遷移能力的影響;3種胰腺癌細(xì)胞系經(jīng)皮膚接種方式移植入裸鼠,經(jīng)化療藥物處理后觀察Smad-4基因表達(dá)對裸鼠移植腫瘤的影

5、響。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS13.0軟件完成,計(jì)量資料數(shù)據(jù)表示方式以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD),兩組計(jì)量資料采用非獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),各組指標(biāo)間的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性意義。結(jié)果:MTT結(jié)果顯示不同濃度吉西他濱處理后,DPC-4型胰腺癌細(xì)胞的增殖受到不同程度的抑制,且這種抑制作用呈劑量依賴性,其半數(shù)有效濃度約為14.5gM。流式細(xì)胞術(shù)提示吉西他濱可以明顯促進(jìn)DPC-4型胰腺癌細(xì)胞株的凋亡。