斑蝥素抑制人胰腺癌細胞增殖和誘導其凋亡的實驗研究.pdf

1、研究背景和目的: 斑蝥素(Cantharidin)是傳統(tǒng)中藥斑蝥中提取的活性成份，已被用于肝癌、胃癌的臨床治療。近年來的許多研究證實，它對多種腫瘤細胞具有較強的殺傷和抑制作用，但至今尚未見其單獨作用于胰腺癌的報道。本研究旨在從體內體外兩個水平觀察斑蝥素是否具有抑制人胰腺癌細胞增殖并誘導其凋亡的作用，初步探討其可能的作用機制。 方法: 1．斑蝥素抑制人胰腺癌細胞增殖及誘導其凋亡的體外研究部分①應用MTT法檢測斑蝥素

2、對胰腺癌細胞株sw1990增殖的影響。 ②采用流式細胞術、電鏡、TUNEL法、Hoechst染色的方法檢測斑蝥素對sw1990細胞凋亡的影響。 ③提取sw1990細胞RNA和蛋白分別采用RT-PCR, western blot方法檢測凋亡相關基因(bcl-2,bax,p53,caspase-3)的表達。 2．斑蝥素抑制裸鼠移植瘤胰腺癌細胞生長的研究部分①檢測斑蝥素對裸鼠移植瘤生長的影響。 ②采用組織芯片技

3、術和免疫組化方法，檢測凋亡相關蛋白bcl-2,bax,p53,caspase-3的表達。 結果: 1．斑蝥素誘導胰腺癌細胞凋亡的體外研究部分 ① MTT法結果示，斑蝥素在體外明顯抑制人胰腺癌sw1990細胞的生長，此效應呈時間和劑量依賴性。 ②斑蝥素作用后，形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn)典型的凋亡細胞，Hoechst 33258熒光強染、TUNEL標記陽性,流式細胞儀AnnexinV-FITC/PI雙染法顯示凋亡細胞比率

4、增高。 ③ RT-PCR和western blot檢測可見用藥組bax、p53、caspase-3表達上調，而bcl-2的表達明顯下調。 2．斑蝥素抑制裸鼠移植瘤胰腺癌細胞生長的研究部分 ①用藥組移植瘤體積增長幅度明顯小于對照組，用藥組移植瘤重量小于對照組，差異具有顯著性。 ②免疫組化結果顯示用藥組p53、caspase-3表達明顯上調，而bcl-2/bax的表達明顯下調。 結論: 在體外