Apoptin基因轉(zhuǎn)入人類胰腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、隨著經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，胰腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。目前，胰腺癌位居腫瘤死因第4位，由于起病隱匿，侵襲性強(qiáng)，又缺乏有效的早期診斷方法，確診時往往已屬晚期，診斷后中位生存期不到6個月，其5年生存率僅1%-5%，是預(yù)后最差的腫瘤之一。傳統(tǒng)的手術(shù)治療、放療、化療等治療方法存在各自的局限性。 近年來，隨著分子生物學(xué)研究的飛速發(fā)展，細(xì)胞生長、分化、凋亡的機(jī)制逐漸被認(rèn)識，研究發(fā)現(xiàn)多細(xì)胞生物通過細(xì)胞增殖與凋亡（Apoptosis）來維持自身穩(wěn)定

2、，如若兩者失衡，則可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來治療腫瘤是可以考慮的，將成為治療腫瘤的一個新途徑。國外新近報道的一種小分子蛋白——來自雞貧血病毒的凋亡素（Apoptin）具有潛在的應(yīng)用價值。凋亡素與其它凋亡相關(guān)蛋白不同的是，它能夠選擇性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞凋亡而不殺傷人和鼠的正常二倍體細(xì)胞，且無毒副作用，因此可作為候選抗腫瘤制劑，具有很好的應(yīng)用前景。 目的: 觀察pEGFP-Apoptin基因轉(zhuǎn)入人胰腺癌細(xì)胞

3、株P(guān)ANC-1后，EGFP-A poptin融合蛋白在PANC-1細(xì)胞中的分布和亞細(xì)胞定位，以及EGFP-A poptin融合蛋白對腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)，探討Apoptin在體外誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制。 研究方法: 利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將構(gòu)建的EGFP-Apoptin融合蛋白真核表達(dá)載體導(dǎo)入人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1中，在熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡下觀察EGFP-Apoptin融合蛋白在腫瘤細(xì)胞中的分布、亞細(xì)胞定位；用

4、Annexin V-APC/PI雙染法檢測其在體外誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的效應(yīng)。 結(jié)果: pEGFP-Apoptin被成功轉(zhuǎn)染入胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1，并可見其EGFP-Apoptin融合蛋白在細(xì)胞核中表達(dá)。EGFP-Apoptin組細(xì)胞在各檢測時間點(diǎn)凋亡率明顯高于空白對照組、C2組和Lipo組。 結(jié)論: EGFP-Apoptin融合蛋白在胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1中具有核定位效應(yīng)，可以作為研究Apopti