miR-21對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡和化療敏感性的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、目的：研究miR-21對(duì)胰腺癌細(xì)胞生物行為學(xué)的影響，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　 方法：分別以miR-21類似物和miR-21抑制物轉(zhuǎn)染胰腺癌MIA PaCa-2細(xì)胞，以轉(zhuǎn)染無(wú)義序列組為對(duì)照，采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞術(shù)和Caspase3活性檢測(cè)分析細(xì)胞凋亡，Western Blot法檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)，雙熒光素酶報(bào)告基因的方法探索miR-21的潛在靶基因。
　　 結(jié)果：各種質(zhì)粒在胰腺癌細(xì)胞系MIA P

2、aCa-2中的轉(zhuǎn)染效率約為70％左右。與轉(zhuǎn)染無(wú)義序列的對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染miR-21類似物的細(xì)胞miR-21表達(dá)明顯上調(diào)，細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)，凋亡比例減少，對(duì)化療藥物吉西他濱的敏感性降低。在分子層面，轉(zhuǎn)染miR-21類似物組的Caspase3活性降低，bcl-2蛋白表達(dá)量增高，bax表達(dá)量降低，轉(zhuǎn)染含有野生型Bcl-23’UTR區(qū)的pRL-TK質(zhì)粒后，細(xì)胞海腎熒光素酶產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度增高，而轉(zhuǎn)染含突變型Bcl-23’UTR區(qū)的pRL-TK質(zhì)粒

3、后，細(xì)胞無(wú)明顯改變。而miR-21抑制物組，所得結(jié)果與miR-21類似物組結(jié)果相反，即轉(zhuǎn)染miR-21抑制物后，細(xì)胞增殖能力降低，凋亡比例增高，對(duì)化療藥物吉西他濱的敏感性提高。在分子層面，轉(zhuǎn)染miR-21抑制物之后，Caspase3活性升高，bcl-2蛋白表達(dá)量降低，bax表達(dá)量提高，轉(zhuǎn)染含有野生型Bcl-23’UTR區(qū)的pRL-TK質(zhì)粒后，細(xì)胞海腎熒光素酶產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度降低，而轉(zhuǎn)染含突變型Bcl-23’UTR區(qū)的pRL-TK質(zhì)粒后，細(xì)