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文檔簡介
1、目的:研究南瓜蛋白(cucurmosin,CUS)對人胰腺癌(Pancreatic Cancer,PC)細胞株的增殖抑制作用和對細胞重要分子EGFR的影響,以及CUS聯(lián)合吉非替尼(Gefitinib,GEF)對胰腺癌細胞株的作用;探討CUS對人胰腺癌細胞的影響及其機制,為CUS可能的抗胰腺癌臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
方法:1.采用SRB法測定CUS單用及其與GEF聯(lián)用對體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細胞的
2、增殖抑制作用。
2.集落形成實驗測定CUS單用及其與GEF聯(lián)用對體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細胞集落形成的影響。
3.Western-blot技術(shù)檢測CUS單用以及與GEF聯(lián)用對體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細胞EGFR的影響,CUS對細胞EGFR下游通路蛋白表達的影響。
4. RT-PCR技術(shù)檢測CUS作用于體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細胞對EGFR mRNA
3、的影響。
結(jié)果:1.SRB法結(jié)果顯示,CUS對體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細胞具有顯著的增殖抑制作用,并呈明顯的劑量依賴性和時間依賴性。CUS對PANC-1細胞作用24h、48h和72h的IC50分別為(12.50±0.012)μmol/L、(0.2678±0.020)μmol/L和(0.0677±0.018)μmol/L;CUS對BxPC-3細胞作用24h、48h和72h的IC50分別為(7.88±0.035
4、)μmol/L、(0.7638±0.026)μmol/L和(0.2935±0.023)μmol/L。
2.集落形成實驗表明隨著隨著濃度的增加CUS對人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細胞集落形成抑制率逐漸增加,呈明顯劑量依賴性。當(dāng)CUS濃度為0.025μmol/L時對PANC-1細胞集落形成抑制率為92.37%;當(dāng)CUS濃度為0.05μmol/L時對BxPC-3細胞集落形成抑制率為82.39%。
3.不同濃度CUS分
5、別作用于人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細胞72h后對上述細胞EGFR蛋白表達的水平均有下調(diào)作用,呈劑量依賴性,而對EGFR mRNA的表達水平均無明顯影響;CUS亦可下調(diào)EGFR下游Ras/Raf通路及PI3K/Akt通路蛋白的表達水平。
4. CUS聯(lián)合GEF作用人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細胞與各自藥物單用相比具有以下結(jié)果:①聯(lián)合用藥組對細胞的增殖抑制率大于各自藥物單用組,q>0.85;②聯(lián)合用藥組可明顯下調(diào)細胞
6、EGFR蛋白表達,q>1.15。③聯(lián)合用藥組的集落形成抑制率大于各自藥物單用組,q>1.15;
結(jié)論:1.CUS對體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細胞具有明顯的增殖抑制作用,呈時間依賴性和劑量依賴性。
2.CUS可明顯下調(diào)體外培養(yǎng)的人胰腺癌PANC-1和BxPC-3細胞EGFR蛋白的表達水平,但對EGFR mRNA水平上卻未見明顯影響,提示CUS僅通過干擾蛋白翻譯的階段而發(fā)揮作用;并且CUS也可抑制細胞E
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