體外T細胞活化與輸血免疫抑制的機理研究.pdf

1、輸血引起的受血者機體免疫力下降，在臨床Meta分析中已肯定其可導致受血者腫瘤復發(fā)率與術后感染率增加。我們從初期應答細胞APC入手，研究T淋巴細胞激活的免疫功能變化。如果APC遞呈的抗原功能障礙，可使整個T細胞增殖抑制；如果增加APC的數(shù)量，將擴大T細胞增殖反應的強度。利用CD3/28雙抗體模擬第一、二信號的變化探討免疫上下調節(jié)的可能機制，為我們研究輸血帶來的免疫影響及如何糾正提供可依靠的線索。 1.各血液成份及游離血紅蛋白對雙向

2、混合淋巴細胞反應的抑制作用利用雙向混合淋巴細胞反應(MLR)技術、細胞培養(yǎng)技術及3H胸腺嘧啶(3H-TdR)摻入法，將壓積紅細胞(PRBC)、去白PRBC和游離血紅蛋白，按不同濃度比例加入MLR體系，及增加單核細胞濃度，即利用其體外抗原提呈功能，以PBMC(正常APC)的MLR為陰性對照，以環(huán)胞A為陽性對照，計算上述因素對MLR的抑制率。隨著PRBC、游離血紅蛋白劑量的增加，其對MLR的抑制作用逐漸增強，去除白細胞后可以減弱這一抑制作用

3、；加入紅細胞量較大時，去白PRBC的抑制作用也相對不明顯。兩倍APC可以明顯減弱紅細胞、游離血紅蛋白對MLR的抑制作用。我們得出紅細胞、粒細胞和游離血紅蛋白可能通過干擾APC的提呈功能而抑制MLR，可以應用此方法來解釋及證實大劑量輸血及去白細胞輸血的免疫調節(jié)作用。 2.CD3、CD28抗體增強淋巴細胞轉化功能的研究研究CD3、CD28抗體對淋巴細胞轉化的增強作用，以期了解與評價應用外周血單個核細胞(PBMC)體外擴增淋巴細胞時雙

4、抗體作用特性及APC數(shù)量對擴增的影響。 利用淋巴細胞轉化實驗3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)摻入法、細胞培養(yǎng)技術及流式細胞術(FCM)，以包被CD3抗體、CD28抗體誘導PBMC中淋巴細胞轉化，增加APC濃度，以CD3抗體刺激PBMC(正常APC)中淋巴細胞轉化為對照，以各組刺激指數(shù)(SI)來計算各因素對淋巴細胞轉化的影響，及分析CD8+CD25+細胞占總轉化細胞的百分比變化。正常APC濃度的淋巴細胞轉化組，CD3抗體可增加淋巴細

5、胞轉化，CD28抗體有協(xié)同作用；去APC組，CD3抗體增強淋巴細胞轉化作用明顯下降，CD28抗體仍有協(xié)同作用；4倍APC組，CD3抗體可以明顯增強淋巴細胞轉化作用，CD28抗體協(xié)同作用不明顯。CD28抗體單獨無增加淋巴細胞轉化作用。流式細胞儀結果與SI結果平行。因此我們認為CD28抗體可協(xié)同CD3抗體模擬體內第一、二信號增強誘導淋巴細胞轉化，CD28可替代APC的第二信號作用，但APC有其它獨立活化淋巴細胞的作用。 3.CD28

6、抗體協(xié)同CD3抗體活化的T細胞功能研究利用抗CD3、CD28抗體模擬第一、二信號在體外作用于人外周血單個核細胞(PBMC)，研究其對T細胞活化的功能。用3H-TdR法測定CD3、CD28抗體對淋巴細胞轉化的功能，用流式細胞術(FCM)測定增殖活化后T細胞的免疫表型變化及T細胞激活后CD154的表達，酶聯(lián)免疫測定細胞因子γ干擾素(IFN-γ)的分泌水平，ELISPOT測定單個細胞IFN-γ、IL-2分泌表達，及RT-PCR測定Fas、Fo

7、xp3、TGFβ1和LAG3基因mRNA表達水平。CD3、28抗體協(xié)同作用PBMC后其刺激指數(shù)(SI)明顯優(yōu)于單獨使用CD3抗體，CD28抗體單獨使用無刺激作用；不同濃度包被的搭配刺激作用強弱不同。流式細胞儀(FCM)結果顯示單獨CD28抗體組無活化作用，CD3抗體組和CD3/28抗體組CD4+CD25、CD8+CD25+百分率均有不同程度的升高，CD154表達輕微上升；CD3抗體組IFN-γ上升緩慢且持續(xù)時間短，CD3/28抗體組IF

8、N-γ水平上升早且持續(xù)時間長；ELISPOT顯示CD3/28抗體組IFN-γ、IL-2均表達較強，F(xiàn)as、TGFβ1基因mRNA表達水平下調，F(xiàn)oxp3、LAG3基因mRNA表達風度值過低無法檢測。CD28抗體可能通過下調抑制T細胞活化的基因，或增強某些活化基因的表達來誘導T細胞充分活化，使具有殺傷活力的CD8+CD25+數(shù)質量增加，免疫向Th1偏移，從而增強了機體細胞免疫力。從側面證明輸血產生的負向調節(jié)使IFNγ、IL-2表達下降，T