免疫抑制劑Fk506對乳腺腫瘤細胞株的體外作用研究.pdf

1、本實驗利用FK506(Tacrolimus),對乳腺腫瘤細胞系MCF-7進行體外作用研究,發(fā)現(xiàn)FK506可以抑制乳腺腫瘤細胞增殖;MTT結(jié)果顯示,24 h與48 h的半抑制濃度基本一致,說明其在較短時間內(nèi)即可發(fā)揮有效作用。細胞形態(tài)學(xué)觀察以及細胞染色表明,FK506沒有誘導(dǎo)細胞凋亡,而很可能是抑制了細胞的分裂。
　　 由于FK506的結(jié)合底物FKBP4(FK506 binding protein4)是免疫親和蛋白家族中的一員,主要

2、作用是作為輔分子伴侶,與固醇類受體形成復(fù)合體,幫助其折疊,穩(wěn)定以及轉(zhuǎn)運;同時,它在細胞骨架的裝配以及細胞分裂器定位調(diào)節(jié)中也發(fā)揮了重要作用,因此,FK506抑制乳腺腫瘤細胞增殖有可能與FKBP4的功能有關(guān)。此外,腳手架蛋白GIPC1(GIPC PDZdomain containing family,member1),作為乳腺腫瘤細胞的重要分子標(biāo)記之一,是FKBP4一個潛在的相互作用蛋白。本實驗室在先前的研究中發(fā)現(xiàn),在乳腺腫瘤干細胞中,存在

3、FKBP4與GIPC1共低表達現(xiàn)象,說明二者有可能存在功能相關(guān)性。還有實驗表明,GIPC1與IGF1R結(jié)合,可以使之穩(wěn)定,進而促進細胞增殖,抑制凋亡。因此,推測FK506是通過影響FKBP4與GIPC1相互作用,進而破壞IGF1R的穩(wěn)定性而導(dǎo)致細胞增殖的抑制。然而免疫共沉淀實驗未發(fā)現(xiàn)兩者之間存在相互作用,蛋白印跡也未檢測到IGF1R的含量與磷酸化狀態(tài)在藥物處理前后有明顯變化。這雖未揭示FK506的作用機制,但也暗示,雖然在固醇類受體介導(dǎo)

4、的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中,需要FKBP4的積極參與,但在作為膜受體代表的IGF1R信號通路里,FKBP4卻未呈現(xiàn)出相應(yīng)的作用。這從另一方面說明,FKBP4作為輔分子伴侶對其底物選擇具有一定的專一性,作用對象可能主要是位于核內(nèi)的固醇類受體,而非膜受體。
　　 經(jīng)雙向電泳(2-DE)蛋白質(zhì)表達圖譜和MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜分析,發(fā)現(xiàn)有17個蛋白在FK506處理細胞前后表達量發(fā)生明顯差異,并進一步從中鑒定出12個蛋白。根據(jù)功能將這些蛋白分為