山羊弓形蟲病免疫膠體金快速檢測試紙條的研制.pdf

1、弓形蟲病(Toxoplasmosis)是由剛地弓形蟲(Toxoplasmagondii)引起的一種重要人畜共患寄生蟲病。該病呈世界性分布，感染范圍廣，對人畜安全構(gòu)成極大威脅。目前弓形蟲疫苗的研究尚處于動(dòng)物試驗(yàn)階段，其安全性和有效性有待驗(yàn)證，所以推進(jìn)弓形蟲診斷技術(shù)的研究顯得尤為重要。目前弓形蟲病的診斷方法主要分為病原學(xué)診斷、免疫學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷，免疫膠體金檢測技術(shù)作為免疫學(xué)診斷方法，以其操作簡單、敏感特異、穩(wěn)定性強(qiáng)、不需要特殊設(shè)備和

2、結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于病原微生物、毒素、藥物殘留等方面的檢測。
　　本試驗(yàn)采用重組弓形蟲速殖子膜表面蛋白 SAG2(P22)作為診斷抗原，利用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金，與葡萄球菌 A蛋白(SPA)結(jié)合形成探針，采用超速離心法純化探針，對試紙條制備條件進(jìn)行篩選，組裝山羊免疫膠體金快速檢測試紙條，并對試紙條的靈敏性、特異性和可靠性進(jìn)行分析。
　　本試驗(yàn)擴(kuò)增了弓形蟲SAG2基因，構(gòu)建pGEX-4T-1-SAG2重組質(zhì)粒

3、，通過大腸桿菌表達(dá)和切膠純化，得到高純度的重組SAG2蛋白。篩選得出試紙條制備的最佳條件：20nm粒徑的膠體金在pH6.4的條件下標(biāo)記25ug·L-1SPA形成的探針結(jié)合最牢固，以四硼酸鈉稀釋探針，以BSA+NaN3+聚乙二醇10000混合液作為探針穩(wěn)定劑，以Sartorius CN140型硝酸纖維膜作為載體，以1.0mg mg·L-1的重組SAG2蛋白包被檢測線，以0.9mg mg·L-1馬抗山羊IgG包被質(zhì)控線，組裝的免疫膠體金檢測