鏈霉素膠體金免疫層析法檢測試紙條的研制.pdf

1、鏈霉素(SM)是一種氨基糖甙類抗生素，在醫(yī)學上由于其存在嚴重的耳及腎毒性，已被其它新藥所取代。但在畜禽疾病防治方面，該藥對奶牛乳房炎、子宮內(nèi)膜炎、雞傳染性鼻炎等有很好的療效，仍是常用藥物之一。但由于不規(guī)范用藥常會引起畜禽產(chǎn)品中的超標殘留，對人類的健康構成潛在危害。 鏈霉素殘留的檢測方法比較多樣化，但都存在一定的缺陷：理化分析法程序復雜、分析費用高，不適宜大量樣品的檢測；微生物法耗時長、靈敏度不高。酶聯(lián)免疫法(ELISA)和膠體金

2、免疫層析法(GICA)是兩種快速、靈敏、特異和安全的檢測技術，其規(guī)模化篩選特點更適應于常規(guī)化檢測需要。 為探索并建立一種能夠快速有效地檢測鏈霉素殘留的方法，本研究采用單克隆抗體技術和膠體金免疫層析技術，合成并制備了人工抗原、抗鏈霉素單克隆抗體和膠體金，采用競爭法建立了檢測SM殘留的GICA方法，成功研制了鏈霉素膠體金免疫層析試紙條，試紙條靈敏度、特異性、穩(wěn)定性等均達到檢測要求。 采用CMO法合成了鏈霉素人工抗原，用ELI

3、SA和紫外掃描法鑒定了偶聯(lián)效果。通過體外擴大培養(yǎng)雜交瘤細胞，將細胞接種到小鼠體內(nèi)，采用體內(nèi)誘生法制備含抗鏈霉素單抗的腹水。腹水經(jīng)辛酸一硫酸銨法純化后用全抗原對單抗進行質(zhì)量鑒定，蛋白濃度為4.2mg/ml，包被抗原稀釋度1：1600，單抗效價為1：160000，線性檢測范圍為10～1000ng/ml，直線方程為y=1.0522-0.3276x，半數(shù)抑制濃度為93.22ng/ml，定量限為22.64ng/ml，檢測限約為5ng/ml，單抗對

4、新霉素、慶大霉素、丁胺卡那霉素、阿米卡星、恩諾沙星、氨芐青霉素、磺胺喹噁啉的交叉反應率均<0.1％。 采用檸檬酸三鈉還原法制備不同粒徑的膠體金，并選用直徑18nm左右(2ml檸檬酸三鈉)的膠體金標記的單抗作為檢測試劑，單抗加入量108μg/ml，標記pH控制在8.5左右(50μl/mlK<,2>CO<,3>)。采用進口Ahlstrom8964玻璃纖維膜作為金吸附材料，Millipore135硝酸纖維素膜作為層析材料制成試紙條?？?/p>