磺胺對(duì)甲氧嘧啶膠體金免疫層析快速檢測(cè)試紙條的研制.pdf

1、磺胺對(duì)甲氧嘧啶(Sulfametoxydiazine，SMD)是磺胺類藥物的一種，其抗菌范圍廣、副作用小，乙?；实?，且溶解度高。獸醫(yī)臨床上SMD常用于敏感菌所致的泌尿生殖道感染、呼吸道感染、消化道感染和皮膚軟組織感染及作飼料添加劑。但大量或長期使用可使其在動(dòng)物體內(nèi)蓄積，造成藥物殘留，對(duì)人類的健康構(gòu)成潛在危害。
　　 膠體金免疫層析技術(shù)具有方便快捷、特異敏感、穩(wěn)定性強(qiáng)、不需要特殊設(shè)備和試劑、結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點(diǎn)，因而特別適合于廣大

2、基層獸醫(yī)人員用來大批量檢測(cè)和大面積普查等，具有巨大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景。本試驗(yàn)應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)，進(jìn)行磺胺對(duì)甲氧嘧啶殘留檢測(cè)方法的研究，以期建立一種快速檢測(cè)磺胺對(duì)甲氧嘧啶殘留的方法。
　　 1、SMD單克隆抗體的制備及鑒定。本研究將雜交瘤細(xì)胞株接種到小鼠體內(nèi)，采用體內(nèi)誘生腹水法制備了單抗的腹水。用重氮法和戊二醛法將SMD偶聯(lián)到牛血清白蛋白(BSA)，制成了人工抗原SMD-BSA，并用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行了掃描鑒定。腹水經(jīng)

3、辛酸-硫酸銨法純化后，單抗蛋白濃度為2.27mg/mL，用包被抗原SMD-BSA對(duì)單抗進(jìn)行質(zhì)量鑒定，抗體工作濃度為1∶10000，抗原工作濃度為1∶4000，用確定的最佳抗原抗體工作濃度進(jìn)行CiELISA測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.2962X+0.0684(R2=0.9952)，計(jì)算出IC50為28ng/mL，LOD為1.91ng/mL，LOQ為8.63ng/mL，通過對(duì)其他六種磺胺類藥物的交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)表明該SMD單抗特異性較好。
　

4、　 2、SMD膠體金快速檢測(cè)試紙條的研制。采用檸檬酸三鈉還原法制備24nm膠體金，鑒定后用膠體金標(biāo)記純化后的單克隆抗體，并將金標(biāo)抗體吸附在玻璃纖維素膜上。將抗原SMD-BSA和羊抗鼠IgG分別包被在硝酸纖維素膜上組裝成試紙條。然后對(duì)試紙條的各個(gè)條件進(jìn)行優(yōu)化，確定了最佳條件。用該試紙條檢測(cè)SMD標(biāo)準(zhǔn)液，檢測(cè)限為100ng/mL。試紙條對(duì)SQ、SD、ST、SMZ、SDM'、SA交叉反應(yīng)較弱，特異性較好。經(jīng)測(cè)試，不同批次間試紙條重復(fù)性較好，

5、4℃條件下可保存10周。
　　 3、SMD膠體金快速檢測(cè)試紙條的初步應(yīng)用。對(duì)牛奶、雞蛋、蜂蜜樣本進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，經(jīng)檢測(cè)在牛奶中的藥物添加回收率為85.3％～104.6％；雞蛋中的添加回收率為：81.4％～113.1％；蜂蜜中的添加回收率為73.8％～89.2％。并用處理過的無SMD成份的牛奶、雞蛋、蜂蜜樣本添加SMD標(biāo)準(zhǔn)液，用試紙條進(jìn)行檢測(cè)，符合率分別為88％、84％、76％。
　　 實(shí)驗(yàn)表明，本實(shí)驗(yàn)所制試紙條可用于動(dòng)