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文檔簡介
1、有機磷農(nóng)藥目前仍在世界范圍內(nèi)廣泛使用,其檢出率高、超標嚴重、毒性大,對消費者的身體健康造成了極大的危害。加大有機磷農(nóng)藥的監(jiān)控力度,開發(fā)快速檢測技術(shù)成為有機磷農(nóng)藥殘留檢測的研究趨勢,是事關(guān)國計民生的重大食品安全問題。 本研究基于免疫分析原理,利用膠體金標記技術(shù),研制了一種膠體金免疫層析試紙條,為有機磷農(nóng)藥的現(xiàn)場監(jiān)控提供了可能,并為農(nóng)藥小分子的膠體金免疫層析試紙條的制作提供了理論依據(jù)。本實驗的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下: 1.通
2、過重氮化法合成了一種有機磷人工抗原。先將合成的有機磷半抗原產(chǎn)物通過質(zhì)譜分析和核磁共振鑒定,確定半抗原合成成功。偶聯(lián)后的全抗原經(jīng)紫外掃描和紅外光譜鑒定,確定半抗原與載體蛋白偶聯(lián)成功。經(jīng)濃度測定,有機磷人工抗原產(chǎn)物的蛋白含量為4.32mg/ml。通過紫外吸收法測得半抗原和載體蛋白的偶聯(lián)比為7.61:1。 2.制備了有機磷單克隆抗體膠體金標記探針,確定膠體金標記的最佳pH為8.0,最適蛋白量為24μg/ml。通過斑點金免疫滲濾實驗和免
3、疫層析實驗,鑒定制備的金標抗體探針具有免疫活性。 3.以有機磷人工合成抗原為包被抗原固定于硝酸纖維素膜的檢測線位置,以羊抗鼠IgG包被于硝酸纖維素膜的控制線位置,組裝了膠體金免疫層析試紙條。對試紙條的各個組分進行了研究,確定了硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊等膜材料的使用型號,對各種膜的浸泡處理液的配方進行了優(yōu)化選擇,對免疫層析反應(yīng)的溶液系統(tǒng)進行了篩選,并對包被抗原、羊抗鼠二抗及金標抗體的濃度和噴量進行了調(diào)試和確定。最后對制備的膠體
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