P2X3受體在神經(jīng)病理性疼痛中上調(diào)對JNK和P38活化的影響.pdf

1、目的:通過慢性背根神經(jīng)節(jié)壓迫(CCD)的大鼠神經(jīng)病理性疼痛(NP)模型，觀察P2X3受體激活后能否引起JNK和P38在DRG上表達(dá)和活化的改變，進(jìn)一步探討P2X3受體在NP中的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.用12只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠隨機(jī)構(gòu)建NP模型(CCD)組(n=6)及其假手術(shù)(SHAM)組(n=6):在手術(shù)前1d，術(shù)后第1、4、7、10、14、21、28和35d測量雙側(cè)后足的50％機(jī)械縮腿痛閾

2、閾值(50％MPWT)。
　　2.檢測CCD大鼠術(shù)后28d內(nèi)的P2X3受體在DRG上的表達(dá)趨勢:用15只SD雄性大鼠隨機(jī)分成未處理大鼠(NAIVE)組(n=3)和構(gòu)建CCD模型(n=12); CCD大鼠隨機(jī)在術(shù)后第7d(POD07)(n=3)、術(shù)后第14d(POD14)(n=3)、術(shù)后第21d(POD21)(n=3)或術(shù)后第28d(POD28)(n=3)快速取材L4、L5 DRG，應(yīng)用蛋白定量檢測P2X3受體水平。
　　3.

3、檢測CCD大鼠和SHAM大鼠術(shù)后給予P2X3受體激動劑后引發(fā)的痛行為之一抬腿的持續(xù)時間變化:將36只SD雄性大鼠隨機(jī)構(gòu)建CCD組（18只）和SHAM組（18只），18只大鼠分別又隨機(jī)在術(shù)后第14d給予足底注射:H2O(n=6)，β，γ-meATP100nmol(n=6)和β,γ-meATP500nmol(n=6)，體積均為50μl;檢測各組給藥后每分鐘抬腿時間(PLTPM)。
　　4.檢測CCD大鼠和SHAM大鼠術(shù)后JNK、pJN

4、K（JNK磷酸化活化型）、P38和pP38（P38磷酸化活化型）在DRG上的表達(dá)變化:將9只SD雄性大鼠隨機(jī)分成NAIVE組(n=3)、SHAM組(n=3)和CCD組(n=3);快速取材L4和L5 DRG，應(yīng)用蛋白定量檢測JNK、pJNK、P38和pP38。
　　5.檢測CCD大鼠和SHAM大鼠術(shù)后給予P2X3受體激動劑后P2X3、JNK、pJNK、P38和pP38在DRG上的表達(dá)變化:將18只SD雄性大鼠隨機(jī)構(gòu)建CCD組（9只）

5、和SHAM組（9只），9只大鼠分別又隨機(jī)在術(shù)后第14d給予足底注射:H2O(n=3)，β，γ-meATP100nmol(n=3)和β，γ-meATP500nmol(n=3)，體積均為50μl;快速取材L4和L5 DRG，應(yīng)用蛋白定量檢測P2X3、JNK、pJNK、P38和pP38。
　　結(jié)果:
　　1.CCD模型大鼠術(shù)后第1、4、7、10、14、21、28、35d CCD組的手術(shù)側(cè)50％MPWT比較自身手術(shù)對側(cè)或SHAM組的

6、手術(shù)側(cè)后足均顯著下降(P＜0.001);
　　2.CCD模型大鼠DRG上P2X3在POD14組與NAIVE組比較表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05);
　　3.在18只SHAM大鼠，給予β，γ-meATP100nmol后第1min與給予H2O比較PLTPM明顯增加(P＜0.01)，在給予β,γ-meATP500nmol后第1min與給予H2O比較PLTPM顯著增加(P＜0.001);在18只CCD大鼠，給予β，γ-meATP100nmo

7、l后第1min與給予H2O比較PLTPM顯著增加(P＜0.001);給予β,γ-meATP500nmol后第1、2、3、5min與給予H2O比較PLTPM顯著增加（P＜0.001），第6min PLTPM增加（P＜0.05）;此外，給予β,γ-meATP500nmol的CCD大鼠和給予β,γ-meATP500nmol的SHAM大鼠相比在給藥后第2min PLTPM顯著增加(P＜0.001)。
　　4.NAIVE組、SHAM組和CC

8、D組組間比較DRG上.JNK、pJNK、P38和pP38都沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變化。
　　5.檢測CCD大鼠和SHAM大鼠術(shù)后給予P2X3受體激動劑后P2X3、JNK、pJNK、P38和pP38在DRG上的表達(dá)變化:(1)P2X3:給予H2O的CCD大鼠和給予H2O的SHAM大鼠相比表達(dá)增加（P＜0.05），給予β,γ-meATP100nmol的CCD組和給予β,γ-meATP100nmol的SHAM組比較明顯增加(P＜0.01);此

9、外，給予β,γ-meATP100nmol的CCD組與給予H2O的CCD組比較增加（P＜0.05）。(2)JNK:給予β，γ-meATP100nmol的CCD組和給予β,γ-meATP100nmol的SHAM組比較明顯增加(P＜0.01)，給予β,γ-meATP500nmol的CCD組和給予β,γ-meATP500nmol的SHAM組比較增加（P＜0.05）;此外在CCD大鼠，給予β,γ-meATP100nmol和給予β，γ-meATP5

10、00nmol均比較給予H2O表達(dá)增加（P＜0.05）。(3)pJNK:給予β,γ-meATP500nmol的CCD組和給予β,γ-meATP500nmol的SHAM組比較減少(P＜0.05)。(4)P38:多組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)pP38:給予β，γ-meATP100nmol的CCD組和給予β,γ-me ATP100nmol的SHAM組比較減少(P＜0.05)。
　　結(jié)論:在CCD模型大鼠中P2X3受體激活后發(fā)生了JNK在