溶血磷脂酸對P2X3受體介導(dǎo)的骨癌痛作用及機制——LPA1與P2X3受體引起的DRG神經(jīng)元鈣離子濃度變化.pdf

1、疼痛是中晚期癌癥患者的常見癥狀，由于常規(guī)止痛藥物療效不甚明顯，給患者帶來了極大的生理心理傷害。因此，對于癌癥患者的疼痛機制研究及探索新的鎮(zhèn)痛方法是目前醫(yī)務(wù)工作者面臨的重要任務(wù)。臨床三大腫瘤肺癌、乳腺癌、前列腺癌均易發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，且骨腫瘤患者的疼痛發(fā)生幾率及嚴(yán)重程度均較其他患者顯著增高，因此從骨腫瘤入手研究癌癥性疼痛具有更好的臨床意義。利用 Walker256腫瘤細(xì)胞株來建立骨癌痛模型的技術(shù)目前已經(jīng)較為成熟，可模擬臨床癌痛狀態(tài)，且致瘤性良好

2、，模型成功率高，具有較好的研究價值。
　　P2X嘌呤受體在疼痛發(fā)生發(fā)展中的作用已經(jīng)被諸多研究證實，尤其是P2X3亞單位高度選擇性的表達(dá)于小直徑的感覺神經(jīng)元，與痛覺信號傳遞密切相關(guān)。ATP導(dǎo)致的DRG細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化已經(jīng)被用于表示傷害感受性刺激的反應(yīng)，初級DRG神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)是調(diào)查神經(jīng)生理和傷害性信號的有用模型體系。ATP敏感的P2X3受體在疼痛系統(tǒng)中扮演重要角色，觸發(fā)“疼痛信號”。一旦ATP被釋放進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，DRG初級傳入神經(jīng)纖

3、維及其胞體上的P2X3受體就被激動，進(jìn)而導(dǎo)致電壓門控鈣離子通道開放，鈣離子內(nèi)流導(dǎo)致細(xì)胞去極化，已知周圍神經(jīng)末梢去極化會導(dǎo)致疼痛感。在癌痛患者中，其介導(dǎo)疼痛發(fā)生的P2X3受體的功能及數(shù)量均得到了一定程度的上調(diào)，是何種分子導(dǎo)致了其上調(diào)目前尚無明確結(jié)論。
　　溶血磷脂酸(Lysophosphatidic Acid，LPA)是具有生長因子樣作用的脂類小分子物質(zhì)，在體內(nèi)主要由被激活的血小板產(chǎn)生，已知的 LPA受體有6種類型，研究較多的是LP

4、Al、LPA2和LPA3三種受體。LPA是一種G蛋白偶聯(lián)受體，其胞內(nèi)信號傳導(dǎo)機制主要分為四種：磷酸肌醇通路、抑制cAMP通路、激活Ras-MAPK通路、激活Rho通路。已經(jīng)有專家研究發(fā)現(xiàn)癌癥患者的血液溶血磷脂酸（LPA）濃度明顯高于正?；颊?，使得LPA成為疼痛調(diào)節(jié)機制研究的新熱點。
　　為了進(jìn)一步研究溶血磷脂酸對P2X3受體介導(dǎo)的骨癌痛作用及機制，本研究分三個步驟(1)建立大鼠脛骨癌痛模型并觀察其疼痛閾值變化；（2）觀察免疫熒光檢

5、測中DRG神經(jīng)元上LPA1與P2X3受體的表達(dá)情況；（3）應(yīng)用熒光鈣離子成像技術(shù)觀察 LPA對脛骨癌痛大鼠 DRG神經(jīng)元上P2X3受體通道的調(diào)控作用及可能的細(xì)胞內(nèi)信號途徑。主要研究結(jié)果如下：
　　1．模型建立情況
　　雌性 Wistar大鼠脛骨骨髓腔內(nèi)接種 Walker256腫瘤細(xì)胞后14-21天，使用von frey纖維絲檢測大鼠患肢足底6個位點的機械痛閾值，較術(shù)前有明顯降低，且明顯的間歇性抬腿、跛行等自發(fā)性疼痛行為。以上

6、結(jié)果表明大鼠骨癌痛模型成功建立，模型主要行為學(xué)特征為機械性痛覺過敏和自發(fā)性運動疼痛。
　　2.脛骨癌痛大鼠DRG中LPA1及P2X3受體的表達(dá)量升高
　　在DRG組織切片和急性分離的DRG神經(jīng)元上用免疫熒光方法顯示P2X3受體的表達(dá)量明顯增高，且 LPA1和P2X3受體共表達(dá)于DRG神經(jīng)元，為LPA對P2X3受體的調(diào)控作用提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。
　　3.在急性分離的脛骨癌痛模型大鼠DRG神經(jīng)元上，應(yīng)用 Ca2+成像技術(shù)觀察L

7、PA對P2X3受體通道的調(diào)控作用及可能的信號通路。
　　LPA可以增強P2X3受體激動后導(dǎo)致的DRG細(xì)胞內(nèi)Ca2+內(nèi)流效應(yīng)，且LPA1阻斷劑VPC32183可以有效阻斷這種效應(yīng)；Rho信號通路阻斷劑胞外酶C3可以部分阻斷LPA對于P2X3受體的增強效應(yīng)。以上結(jié)果說明LPA可以調(diào)控P2X3受體通道的功能，其機制可能與Rho信號通路有關(guān)。
　　綜上所述，大鼠脛骨癌痛模型成功建立后，DRG神經(jīng)元上 P2X3受體的表達(dá)上調(diào)，在LPA