腺病毒5型knob蛋白的原核表達(dá)、純化及其單克隆抗體的制備.pdf

1、腺病毒5型是一種十分有效的基因治療載體，廣泛應(yīng)用于體內(nèi)體外的基因治療實(shí)驗(yàn)。腺病毒5型能夠感染很多細(xì)胞，包括分裂細(xì)胞和靜止細(xì)胞。它的侵入機(jī)制主要包括兩個(gè)階段。首先，腺病毒以其knob蛋白和柯薩奇腺病毒受體（coxsackie adenovirus receptor，CAR）結(jié)合，錨定在細(xì)胞表面；然后，其五鄰體基底部（Penton base）再與整合素結(jié)合，整合素作為輔助分子介導(dǎo)了病毒內(nèi)吞進(jìn)入內(nèi)涵體小泡。整個(gè)過(guò)程中，knob起了粘附病毒的作

2、用，五鄰體起了內(nèi)化病毒的作用，它們隔司其職，相互配合，兩者對(duì)腺病毒的感染至關(guān)重要。 腺病毒用于基因治療的一個(gè)主要問(wèn)題是缺乏靶向性。為了解決這個(gè)問(wèn)題，一個(gè)經(jīng)常采用的策略是在knob上進(jìn)行靶向改造，使它不與CAR結(jié)合，而與目標(biāo)受體結(jié)合。為了研究knob的結(jié)構(gòu)與功能，本研究表達(dá)了knob，CAR并制備了knob的單克隆抗體。 本研究利用大腸桿菌BL21(DE3)表達(dá)了knob蛋白。通過(guò)Ni2+-NTA系統(tǒng)的純化，純度可達(dá)95％