豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白的表達及其單克隆抗體的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus)屬于圓環(huán)病毒科，圓環(huán)病毒屬。病毒分為PCV1和PCV2兩種，其中PCV1無致病性，PCV2對豬具有致病性，可導致斷奶仔豬發(fā)熱、生長不良、呼吸障礙、母豬流產等臨床癥狀，而且可引起免疫抑制，容易繼發(fā)或并發(fā)其他疾病，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了非常大的經濟損失。為進一步研究PCV(尤其是PCV2)在我國的流行性，本研究針對PCV衣殼蛋白進行了以下研究： 根據GanBank 中已發(fā)表的Ⅰ型豬圓環(huán)病

2、毒(PCV1 U49186株)、Ⅱ型豬圓環(huán)病毒(PCV2 DQ104422株)全基因組序列，各設計一對引物，以JS分離株病毒為材料，用PCR分別擴增出病毒衣殼蛋白PCV1-Cap、PCV2-Cap編碼基因片段，擴增的DNA片段大小約為579bp，與預期大小相同。將擴增的PCV1-Cap、PCV2-Cap基因片段分別克隆到pGEM-T Easy載體中，經酶切鑒定證實為目的基因。再將克隆后的PCV1-Cap、PCV2-Cap基因片段分別定向

3、克隆入pGEX-6P-1質粒載體，獲得重組質粒pGEX-PCV1和pGEX-PCV2。重組菌裂解物的SDS-PAGE分析證明，含有重組質粒pGEX-PCV1或含有重組質粒pGEX-PCV2的大腸桿菌BL21均分別能夠表達分子量約為48ku的融合蛋白，從而為研制PCV單克隆抗體提供了抗原。 利用提取研究一中制備的融合蛋白GST-PCV2為抗原免疫BALB/c小鼠(免疫時間分別為8周齡、10周齡、12周齡)。最后一次免疫3天后，取其

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