乙型肝炎病毒多聚酶末端蛋白的克隆、表達(dá)、純化及單克隆抗體制備.pdf

1、本文應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)成功表達(dá)了HBV-TP蛋白并純化，并以此為基礎(chǔ)利用獲得的蛋白為抗原利用單克隆抗體技術(shù)建立了穩(wěn)定分泌抗HBV-TP單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系并初步應(yīng)用，其主要結(jié)果如下： 1.運(yùn)用PCR技術(shù)以含有HBV全基因片段的質(zhì)粒pTKHH2為模板，針對(duì)所用表達(dá)載體和HBV-TPcDNA序列設(shè)計(jì)引物，在其5’和3’端引入酶切位點(diǎn)BamHI和EcoRI克隆并擴(kuò)增HBV-TP基因片段，插入克隆載體pGEM-TEasy進(jìn)行測(cè)序，并

2、以此為基礎(chǔ)，構(gòu)建了原核表達(dá)載體：pRSET-A/HBV-TP； 2.通過(guò)IPTG誘導(dǎo)，成功地使表達(dá)載體在原核系統(tǒng)中高效表達(dá)(＞25％)并以Ni2+柱純化了目的蛋白(純度大于95％)；免疫印跡雜交證實(shí)了目的蛋白的表達(dá)； 3.以獲得的HBV-TP蛋白為抗原免疫BALB/c小鼠，取其脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合，建立雜交瘤細(xì)胞系，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)了雜交瘤細(xì)胞的抗體效價(jià)均大于10-5； 4.用W