靶向抑制EGFR、COX-2治療肝門(mén)膽管癌初步研究.pdf

1、目的：上皮來(lái)源腫瘤常見(jiàn)表皮生長(zhǎng)因子受體和COX-2蛋白的異常表達(dá)。嘗試采用EGFR抑制劑和COX-2抑制劑治療這些腫瘤已取得了一定的成功。本研究擬闡明EGFR在肝門(mén)膽管癌中的表達(dá)和臨床預(yù)后意義；評(píng)價(jià)聯(lián)合靶向抑制COX-2、EGFR在肝門(mén)膽管癌治療中的作用。 方法：用免疫組化染色檢測(cè)33例肝門(mén)膽管癌組織中EGFR及其下游通路蛋白p-MAPK等指標(biāo)的表達(dá)，評(píng)價(jià)這些指標(biāo)表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)及患者預(yù)后的關(guān)系。聯(lián)合EGFR酪氨酸激酶抑制劑

2、(EGFR-selectivetyrosinekinaseinhibitor，EGFRTKI)Erlotinib和COX-2抑制劑(Cox-2inhibitor，Cox-2I)celecoxib作用于肝門(mén)膽管癌細(xì)胞株，采用MTT、流式細(xì)胞學(xué)分析，觀測(cè)細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞生長(zhǎng)周期變化。ELISA方法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞分泌的PGE2含量。Western方法測(cè)定藥物作用后細(xì)胞內(nèi)EGFRTKI作用通路的下游蛋白變化以及凋亡、細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)

3、。裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)藥物體內(nèi)作用效果，Erlotinib、celecoxib用藥三周，觀測(cè)腫瘤變化。 結(jié)果：1.肝門(mén)膽管癌中EGFR、p-MAPK、COX-2、VEGF和E-cadherin的陽(yáng)性表達(dá)率分別為36.4，75.8，93.9，57.6和15.2％。臨床病理學(xué)上，EGFR陽(yáng)性表達(dá)和腫瘤細(xì)胞分級(jí)(p=0.028)、淋巴管浸潤(rùn)(p=0.016)、神經(jīng)侵犯(p=0.003)相關(guān)。生存分析顯示EGFR表達(dá)是顯著的負(fù)性預(yù)后因子(p

4、=0.02)。EGFR陽(yáng)性患者中位生存期27個(gè)月，EGFR陰性患者中位生存期15個(gè)月。2.聯(lián)合Erlotinib、celecoxib作用肝門(mén)膽管癌細(xì)胞株，抑制腫瘤細(xì)胞QBC939和FRH細(xì)胞增殖，兩者具有協(xié)同作用。Erlotinib阻滯QBC939細(xì)胞周期于G0-G1期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，celecoxib顯著增強(qiáng)Erlotinib作用。EGFR通路下游蛋白p-MAPK、p-Akt受到抑制，NF-κB表達(dá)下降。p27和caspase-3裂解

5、片斷表達(dá)增加。Erlotinib和celecoxib阻滯PGE2的產(chǎn)生，兩者具有協(xié)同作用。3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示，Erlotinib、celecoxib聯(lián)合用藥顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)，與對(duì)照組、Erlotinib、celecoxib單藥組相比，均有顯著性差異。抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用伴隨EGFR下游活性蛋白p-MAPK的下調(diào)和VEGF、Ki67表達(dá)的降低。 結(jié)論：EGFR表達(dá)和腫瘤進(jìn)展病變相關(guān)，是不良預(yù)后的預(yù)測(cè)因子。Erlotinib、celec