Survivin、COX-2與膽管癌的血管生成及COX-2途徑對膽管癌細胞血管生成相關因子影響的實驗研究.pdf

1、膽管癌是膽道常見的惡性腫瘤，雖然在膽管癌診治方面取得一些進展，但其預后仍較差，其中重要的原因是早期診斷困難，而當疾病處在進展期時，腫瘤細胞往往已通過血道、淋巴轉移，從而導致外科根治性切除率低。隨著血管生成在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預后中作用和地位的確立，抗腫瘤血管生成策略成為目前腫瘤治療研究的熱點。既往認為膽管癌是一種血管分布(相對肝癌)較少的腫瘤，但隨著對膽管癌形成分子機制研究的深入，血管生成在膽管癌發(fā)生發(fā)展中的重要性已逐步被重視。Survi

2、vin是一種結構獨特的凋亡蛋白抑制因子家族的成員，特異地表達于人和鼠的胚胎發(fā)育組織以及多數人類腫瘤細胞。研究表明，Survivin在細胞凋亡和細胞周期的基因調控中發(fā)揮重要作用，而且在腫瘤血管新生調節(jié)中是至關重要的，使其成為一個非常有吸引力的癌癥治療靶點；環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是前列腺素生物合成的限速酶，大量研究表明COX-2表達增強與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關，COX-2上調可能是腫瘤發(fā)生過程中一個重要

3、的限速步驟，COX-2可能通過促進腫瘤細胞增殖和抑制細胞凋亡、促進腫瘤惡性轉化、促進腫瘤血管生成等機制參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展；關于Survivin和COX-2在腫瘤血管生成角色方面的報道并不多見。我們前期的研究發(fā)現Survivin和COX-2基因參與了膽管癌細胞增殖和凋亡過程，本實驗欲了解Survivin、COX-2與膽管癌血管生成的關系及膽管癌血管生成的可能機制，為膽管癌的抗腫瘤血管生成治療提供新依據。 目的：研究Survivin

4、、COX-2與膽管癌血管生成的關系及膽管癌血管生成的可能機制。 方法：采用SP免疫組化染色檢測Survivin、COX-2、VEGF和MVD在膽管癌臨床病理標本中的表達。膽管癌細胞株QBC939于體外培養(yǎng)，每日倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。應用不同濃度的選擇性環(huán)氧合酶-2 抑制劑尼美舒利分別處理細胞，于作用的不同時間收集細胞，應用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linkedimmunoadsordent assay，ELISA)

5、檢測藥物處理前后培養(yǎng)細胞上清液中分泌的VEGF濃度；應用RT-PCR檢測藥物處理前后膽管癌細胞株QBC939中COX-2/VEGF/Survivin基因的表達變化；采用SP免疫組化染色觀察藥物處理前后膽管癌細胞株QBC939中COX-2/VEGF/Survivin蛋白的表達情況。 結果： (1)免疫細胞化學結果顯示膽管癌組織 MVD 值、COX-2、VEGF和Survivin陽性表達率顯著高于正常膽管組織(P<0.05)；(2)

6、膽管癌組織COX-2基因的表達與VEGF表達、MVD值成正相關；(3)膽管癌組織Survivin基因表達與VEGF表達、MVD值成正相關；(4)ELISA表明隨著尼美舒利濃度增加，膽管癌細胞QBC939上清液中分泌的VEGF濃度下降；(5)免疫組化測定顯示隨著尼美舒利濃度增加，COX-2、VEGF和Survivin在QBC939細胞漿中表達下調；(6)RT-PCR測定顯示隨著尼美舒利濃度增加，COX-2、VEGF和Survivin在QB