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文檔簡介
1、目的:
重組艾塞那肽-人血清白蛋白融合蛋白(E2HSA)臨床前藥代動力學(xué)研究。
方法:
建立化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測法(CLEIA)測定獼猴血清中E2HSA的濃度并對其進行方法學(xué)確證;研究E2HSA在大鼠和獼猴體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征;采用放射性同位素125I標(biāo)記法對E2HSA在大鼠體內(nèi)的組織分布和排泄特點進行研究。
結(jié)果:
1.測定生物樣品中藥物濃度的ELISA分析方法建立與確證
該
2、方法可特異性地識別E2HSA的抗原表位,在2~200ng·mL-1的濃度范圍時與血清中其它物質(zhì)無明顯交叉反應(yīng)。方法學(xué)確證表明標(biāo)準品E2HSA在2~200ng·mL-1濃度范圍內(nèi),吸光度與濃度呈依賴關(guān)系,四參數(shù)Logistic擬合:Y(OD值)=A2+(A1-A2)/(1+(X/X0)^P),相關(guān)系數(shù)r均大于0.99,最低定量限為2 ng·mL-1。批間和批內(nèi)精密度為1.3~8.1%,準確度為-3.6~2.3%。樣品在-20℃放置3個月穩(wěn)
3、定性良好,儲備液在-20℃放置7天穩(wěn)定性良好,稀釋1000倍無稀釋效應(yīng)。該分析方法能夠滿足E2HSA臨床前藥代動力學(xué)研究。
2.Wistar大鼠、獼猴皮下注射E2HSA的藥代動力學(xué)研究
Wistar大鼠單次皮下注射1.98 mg·kg-1E2HSA后, E2HSA在大鼠體內(nèi)消除半衰期t1/2為:12.2±1.2 h,平均滯留時間MRTlast為:34.9±1.9 h;血漿清除率CL為:19.1±5.6mL·h-1·k
4、g-1,表觀分布容積Vd為:381.4±50.7 mL·kg-1,AUClast為91652.8±8119.1ng·h·mL-1。獼猴單次皮下注射0.3、0.9和2.7 mg·kg-1E2HSA后,E2HSA在獼猴體內(nèi)消除半衰期t1/2依次為:53.4±8.0 h、50.9±9.1 h、56.8±8.1 h,三個劑量組間沒有統(tǒng)計學(xué)差異;平均滯留時間MRTlast依次為:78.3±6.2 h、89.0±7.6 h、83.3±7.7 h;消
5、除速率常數(shù)ke依次為:0.013±0.003、0.014±0.003、0.015±0.006;血漿清除率CL依次為:1.66±0.27 mL·h-1·kg-1、1.39±0.15 mL·h-1·kg-1、1.36±0.12 mL·h-1·kg-1,低劑量組和中劑量組有統(tǒng)計學(xué)差異,中劑量組合高劑量組沒有統(tǒng)計學(xué)差異,低劑量組和高劑量組有統(tǒng)計學(xué)差異;表觀分布容積Vd依次為:125.5±8.8 mL·kg-1、103.8±28.4 mL·kg-
6、1、110.4±12.2mL·kg-1三個劑量組間沒有統(tǒng)計學(xué)差異;AUClast依次為179182±27148 ng·h·mL-1,630956±68878 ng·h·mL-1,1928196±168615 ng·h·mL-1(比例1∶3.5∶10.8),低、中和高給藥劑量比為1∶3∶9,AUClast與給藥劑量基本呈等比例增加。
獼猴皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次,連續(xù)5次給藥后,5只獼猴的蓄積因子(R)分別
7、為0.91、1.07、0.80、0.62和0.63,平均蓄積因子0.81±0.19。
獼猴皮下注射2.7mg·kg-1E2HSA對靜脈注射0.9mg·kg-1E2HSA的生物利用度為81.9%。
3.Wistar大鼠皮下注射125I-E2HSA的組織分布和排泄研究
組織分布結(jié)果可見2h活殺后各組織的藥物濃度順序為:血清>肺>胃內(nèi)容物>腎>脊髓>小腸內(nèi)容物>腎上腺>胃>卵巢>心>膀胱>輸精管>肝>脾>胰腺>皮
8、膚>小腸>骨骼>子宮>輸卵管>大腸>胸腺>睪丸>腦>肌肉>大腸內(nèi)容物>脂肪。8h活殺后各組織的藥物濃度順序為:血清>肺>腎上腺>腎>胃內(nèi)容物>卵巢>胃>小腸內(nèi)容物>輸卵管>心>輸精管>肝>小腸>脾>脊髓>膀胱>睪丸>子宮>皮膚>胰腺>大腸>骨骼>脂肪>胸腺>腦>肌肉>大腸內(nèi)容物。24h活殺后各組織的藥物濃度順序為:血清>胃內(nèi)容物>皮膚>肺>膀胱>胃>輸卵管>腎>卵巢>輸精管>小腸>大腸內(nèi)容物>腎上腺>心>子宮>肝>睪丸>脾>小腸內(nèi)容物>
9、大腸>骨骼>胰腺>脂肪>脊髓>胸腺>肌肉>腦。96h活殺后各組織的藥物濃度順序為:胃內(nèi)容物>膀胱>血清>大腸內(nèi)容物>腦>皮膚>肺>腎>腎上腺>輸精管>肝>胃>卵巢>小腸內(nèi)容物>輸卵管>子宮>脊髓>心>小腸>脾>大腸>胰腺>睪丸>骨骼>胸腺>肌肉>脂肪。
雄性Wistar大鼠在皮下給予125I-E2HSA(1.98mg·kg-1)后,0~144h內(nèi)從膽汁排泄的藥物量占總給藥量的3.97±1.29%。0~432h內(nèi)從尿液排泄的藥物
10、量占總給藥量的62.86±10.47%。0~432 h內(nèi)從糞便中排泄的藥物量占總給藥量為14.47±4.37%,代謝籠沾染回收到總給藥量的2.83%±0.63%。
結(jié)論:
1.測定生物樣品中藥物濃度的ELISA分析方法建立與確證
建立了簡單、靈敏、快速、可靠、特異性強的E2HSA全長藥物檢測方法,方法的特異性,準確度和精密度良好,符合生物分析方法指導(dǎo)原則要求。
2.Wistar大鼠、獼猴皮下注射E
11、2HSA的藥代動力學(xué)研究
E2HSA在獼猴體內(nèi)消除半衰期t1/2三個劑量組間沒有統(tǒng)計學(xué)差異;AUClast比例1∶3.5∶10.8,低、中和高給藥劑量比為1∶3∶9,AUClast與給藥劑量基本呈等比例增加,顯示在0.3 mg·kg-1~2.7 mg·kg-1的劑量范圍內(nèi)E2HSA在獼猴體內(nèi)的血清藥物濃度呈線性動力學(xué)變化。
獼猴皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次,連續(xù)5次給藥后,平均蓄積因子0.81±0.
12、19,提示皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次,連續(xù)5次后獼猴體內(nèi)血藥濃度不會積聚增加,其中部分獼猴血藥濃度會降低,推測可能有抗體產(chǎn)生。
獼猴皮下注射2.7mg·kg-1E2HSA的絕對生物利用度為81.9%,說明皮下注射可能是一種較為快速、方便、有效的用藥途徑。
3.Wistar大鼠皮下注射125I-E2HSA的組織分布和排泄研究
Wistar大鼠在皮下給予125I-E2HSA(1.98mg·k
13、g-1)后,分別于2h、8h、24h、96h動物活殺后各組織酸沉后放射性結(jié)果顯示:腎臟中藥物含量一直較高,提示經(jīng)尿排泄是一個主要的排泄途徑;藥物在脂肪、肌肉和腦組織中含量一直較低,說明E2HSA不易于進入脂性強的組織且不易透過血腦屏障;胃腸道中的含量一直較高,可能因為蛋白分解代謝中的堿性片段透過胃壁分泌到胃腸內(nèi)容物中。
膽汁、糞尿排泄結(jié)果顯示:糞便、尿液和代謝籠沾染共回收到總給藥量的80.16%,說明125I-E2HSA給藥后
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