菊苣酸的臨床前藥代動力學(xué)研究.pdf

1、目的：考察菊苣酸（CRA）對人源CYP450酶的體外抑制作用，研究CRA在Caco-2細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運特征及CRA在大鼠原位腸血管灌流模型和大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)。
　　方法：⑴在混合人肝微粒體孵育體系中，分別以非那西丁O-脫乙基化（CYP1A2）、安非他酮羥基化（CYP2B6）、阿莫地喹去乙基化（CYP2C8）、雙氯芬酸4’-羥基化（CYP2C9）、S-美芬妥英4’-羥基化（CYP2C19）、右美沙芬O-去甲基化（CYP2D6）、咪達(dá)

2、唑侖1’-羥基化（CYP3A4/5）和睪酮6β-羥基化（CYP3A4/5）反應(yīng)作為7種CYPP450酶亞型代謝活性的標(biāo)志，并用陽性抑制劑對試驗體系進(jìn)行驗證。建立 LC-MS/MS法檢測各特征性反應(yīng)的代謝物生成量，并計算CRA的IC50值，通過代謝轉(zhuǎn)化的變化來考察CRA對人肝微粒體中CYP450酶7種亞型的體外抑制作用。⑵建立了Caco-2細(xì)胞中CRA的測定方法，以P-gp底物地高辛作為陽性對照,考察CRA在不同濃度（1μM、10μM和1

3、00μM）時其在Caco-2細(xì)胞單層上的跨膜雙向轉(zhuǎn)運情況。⑶建立了大鼠原位腸血管灌流模型，通過十二指腸給藥研究腸對CRA的吸收。⑷大鼠24只隨機(jī)分為四組，口服CRA低（25 mg/kg）、中（50 mg/kg）、高（100 mg/kg）三個劑量組和一個靜脈注射組（2 mg/kg），采用建立的LC-MS/MS法測定血漿中 CRA及其代謝物 CAFA和 CA的濃度，運用藥動學(xué)軟件 DAS2.0計算出相應(yīng)的藥動學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果：①CR

4、A對CYP450酶7種亞型（CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4/5（底物為咪達(dá)唑侖、睪酮））均沒有明顯的抑制作用。②CRA在不同濃度（1μM、10μM和100μM）時，從腔面到基底面（AP→BL）的表觀滲透系數(shù)（Papp）值分別為（0.68±0.07）×10-6 cm/sec、（0.85±0.04）×10-6 cm/sec和（0.84±0.05）×10-6 cm/sec,從

5、基底面到腔面（BL→AP）的Papp值分別為（0.70±0.09）×10-6 cm/sec、（0.83±0.10）×10-6 cm/sec和（0.85±0.09）×10-6cm/sec，外排比率ER值均接近1。③十二指腸給藥后，腸血管灌流模型中CRA在灌流液中的濃度隨時間的變化而增大，在90min時趨于穩(wěn)定，腸吸收率為（12.6±0.57）％。④大鼠口服 CRA后在體內(nèi)表現(xiàn)為二室模型，達(dá)峰時間晚，消除較慢。大鼠口服低、中、高劑量 CRA

6、后的藥動學(xué)參數(shù)：藥時曲線下面積（AUC(0-∞)）分別為7886.8±208.9μg/L*h、35468.8±1737.4μg/L*h、45422.1±398.4μg/L*h；半衰期（T1/2z）分別為4.79±1.09 h、5.15±0.9 h、4.80±0.70 h；清除率（CLz）分別為3.3±0.1 L/h/kg、1.4±0.07 L/h/kg、2.2±0.02 L/h/kg；表觀分布容積（Vz）分別為22.5±4.9 L/kg

7、、10.4±1.4 L/kg、15.2±2.3 L/kg；最大血藥濃度（Cmax）分別為1097.7±84.4μg/L、3666.0±195.4μg/L和5597.0±325.0μg/L；達(dá)峰時間（Tmax）均為4.0 h。大鼠尾靜脈注射2.0 mg/kg CRA后的藥動學(xué)參數(shù)：AUC(0-∞)為51432.7±3650.2μg/L*h；T1/2z為4.5±0.4 h；CLz為0.04±0.003 L/h/kg；Vz為0.25±0.03