19-去甲睪酮膠體金免疫層析試紙條的研制.pdf

1、本研究選擇19-去甲睪酮(19-nortestosterone，19-NT)為研究對(duì)象，研制了用于檢測(cè)19-NT殘留的競(jìng)爭(zhēng)性膠體金免疫層析試紙條。利用膠體金的顯色原理達(dá)到快速檢測(cè)樣品中19-NT的殘留。 將19-去甲睪酮經(jīng)羧甲基羥胺肟化，然后采用混合酸酐法將肟化產(chǎn)物分別與牛血清蛋白(bovineserum albumin，BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin，OVA)偶聯(lián)，分別制備19-NT免疫原和包被抗原。采用檸檬酸三鈉還

2、原法制備了18.6nm左右的膠體金溶液。在標(biāo)記19-NT多克隆抗體時(shí)，最佳pH值范圍在8.6～9.8之間，最適標(biāo)記抗體濃度為30μg/ml。選用Waterman公司的Purabind RP硝酸纖維膜，德國(guó)Schleicher&Schuell公司的Glass33玻璃纖維膜，上海金標(biāo)有限公司的CB-SB08玻璃纖維膜、吸水紙、PVC底板組裝成試紙條。其中每墊金標(biāo)墊上噴涂2×稀釋的60μl金標(biāo)抗體，檢測(cè)線和質(zhì)控線分別用Bio-dot XYZ3

3、000金標(biāo)點(diǎn)樣儀噴涂0.5mg/ml的19-NT-OVA包被抗原和0.2mg/ml的羊抗兔IgG二抗。用試紙條檢測(cè)19-NT標(biāo)準(zhǔn)溶液，檢測(cè)限為180ng/ml，檢測(cè)添加19-NT的豬尿樣本時(shí)，檢測(cè)限為200ng/ml，通過(guò)使用ImagJ軟件對(duì)試紙條進(jìn)行定量分析，可以得到的檢測(cè)限為25ng/ml。 本實(shí)驗(yàn)研究的試紙條優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，15min內(nèi)就可以得到檢測(cè)結(jié)果，適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。本研究為19-NT膠體金試紙條的深入研究提供了重要