消退素D1對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人原代肺泡上皮二型細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、目的:探討消退素D1對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人原代肺泡上皮二型細(xì)胞凋亡是否具有保護(hù)作用及其相關(guān)具體機(jī)制。
　　方法:分離培養(yǎng)人原代肺泡上皮二型細(xì)胞,鑒定其表型。以脂多糖(1μg/ml;10μg/ml)處理人原代肺泡上皮二型細(xì)胞24小時(shí)誘導(dǎo)凋亡,另在脂多糖(10μg/ml)處理細(xì)胞之前,以z-VAD處理細(xì)胞30min,收集細(xì)胞,以流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡比例;另外先以消退素D1(1,10或者100ng/ml)處理細(xì)胞30分鐘,再以脂多糖(10μ

2、g/ml)處理細(xì)胞24小時(shí),收集細(xì)胞,以流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡比例;進(jìn)一步在消退素D1處理之前以PI3K和ERK抑制劑處理細(xì)胞30min,再以脂多糖(10μg/ml)處理細(xì)胞,收集細(xì)胞,檢測(cè)細(xì)胞凋亡比例。在以上實(shí)驗(yàn)中收集細(xì)胞提取細(xì)胞總蛋白,以western blot方法檢測(cè)相關(guān)信號(hào)蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:脂多糖可以誘導(dǎo)人原代肺泡上皮二型細(xì)胞凋亡,z-VAD可以抑制這一凋亡的發(fā)生;預(yù)先給以消退素D1可以減輕脂多糖引起的人原代肺泡

3、上皮二型細(xì)胞凋亡,并且抑制脂多糖引起的caspase3的裂解、抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)減少程度和促凋亡蛋白BAX的增加程度,并能檢測(cè)到明顯的AKT磷酸化;以PI3K抑制劑(wortmannin,200nM;LY294002,1μM)預(yù)先處理細(xì)胞,能抑制消退素D1對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的人原代肺泡上皮二型細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用,并且能抑制AKT的磷酸化,抑制消退素D1對(duì)caspase3和BAX表達(dá)的作用,但對(duì)Bcl2的表達(dá)變化未發(fā)現(xiàn)明顯作用。