版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:
觀察 miR-494在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)中的表達(dá)變化,并進(jìn)一步探討miR-494對HK-2細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用及其機(jī)制。
方法:
1、體外培養(yǎng)HK-2,給予1 ug/ml LPS分別干預(yù)0 h、1 h、3 h、6 h、12 h。采用Real-time PCR檢測miR-494的表達(dá)變化。
2、構(gòu)建miR-494慢病毒過表達(dá)及陰性對照載體,轉(zhuǎn)染HK-2細(xì)胞,熒光顯
2、微鏡下估算轉(zhuǎn)染效率。
3、將HK-2分為四組:control組、LPS刺激組、miR-494過表達(dá)+LPS組、miR-494陰性轉(zhuǎn)染+LPS組,除control組外,各組細(xì)胞予以相應(yīng)處理后再均以1 ug/ml LPS干預(yù)6 h。用Real-time PCR檢測各組miR-494、ATF3的表達(dá)水平。Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞法分別檢測各組細(xì)胞的凋亡率。采用ELISA法檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-6、TNF-α的濃
3、度。
結(jié)果:
1、LPS刺激1 h后,HK-2細(xì)胞中miR-494的表達(dá)水平即達(dá)到頂峰,為0 h組的3.19±0.21倍(P<0.05),3 h、6 h和12 h的表達(dá)量逐漸下降,與0 h組的miR-494表達(dá)量均有統(tǒng)計學(xué)意義。
2、LV-miR-494慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染72 h后熒光顯微鏡下觀察ZsGreen綠色熒光,細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率均達(dá)80%以上,qPCR檢測LV-miR-494+LPS組細(xì)胞miR-494
4、較control組的表達(dá)水平為8.57±0.50倍(P<0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,提示轉(zhuǎn)染成功。
3、與control相比,LV-miR-494+LPS組、LV+LPS組及LPS組的miR-494表達(dá)水平分別為(8.57±0.50 vs2.47±0.04 vs2.34±0.02);ATF3 mRNA表達(dá)水平為(2.12±0.37 vs5.84±0.42 vs5.45±0.53),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)
5、 4、流式細(xì)胞檢測各組 HK-2細(xì)胞凋亡水平:與 control組比較,LPS組、LV-miR-494+LPS組及LV+LPS組的細(xì)胞凋亡率明顯高于control組(P<0.05),LV+LPS組與LPS組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
5、ELISA法檢測各組細(xì)胞 IL-6、TNF-α的濃度:在LPS刺激下 LV-miR-494+LPS組、LV+LPS組、LPS組IL-6、TNF-α蛋白水平較control組均顯著
6、提高,且LV-miR-494+LPS組與其它兩組相比,IL-6、TNF-α蛋白水平顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),表明miR-494的過表達(dá)對LPS誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞釋放IL-6、TNF-α有促進(jìn)作用。
結(jié)論:
1、LPS可誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡。
2、重組慢病毒轉(zhuǎn)染HK-2后,miR-494表達(dá)明顯上調(diào),其靶基因ATF3表達(dá)下調(diào)。
3、過表達(dá)miR-494可顯著促進(jìn)炎性因子的釋放,增強(qiáng)L
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- Intermedin對缺氧-復(fù)氧誘導(dǎo)的大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf
- CTGF在介導(dǎo)AgeⅡ誘導(dǎo)的人近端腎小管上皮細(xì)胞肥大中的作用.pdf
- 蟲草多糖對TGF-β1誘導(dǎo)人近端腎小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響.pdf
- 骨形成蛋白-7對馬兜鈴酸誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf
- 自噬對組蛋白介導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf
- 阿魏酸鈉對順鉑誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf
- 腎上腺髓質(zhì)素(ADM)對缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制.pdf
- 人血白蛋白對近端腎小管上皮細(xì)胞ACE2表達(dá)的影響.pdf
- ERK通路抑制劑對白蛋白誘導(dǎo)的人近端腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)合成的影響.pdf
- 苯并[a]芘暴露的小鼠原代支氣管上皮細(xì)胞中miR-320和miR-494對細(xì)胞周期的影響.pdf
- PPARγ激動劑對脂多糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞分泌趨化因子的影響及機(jī)制研究.pdf
- BMP-7對馬兜鈴酸誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf
- Stats激活對缺血-再灌注誘導(dǎo)近曲腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響及其細(xì)胞內(nèi)機(jī)制.pdf
- MG-132對TGF-β-,1-誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化與凋亡的影響.pdf
- 自噬在高糖誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞脂毒性中的作用.pdf
- 脂代謝紊亂對腎小管上皮細(xì)胞hUAT基因表達(dá)的影響.pdf
- SOCS-1對TNF-α誘導(dǎo)人近端腎小管上此細(xì)胞凋亡的影響.pdf
- 木糖醇對人近端腎小管上皮細(xì)胞損害的實驗研究.pdf
- 血管內(nèi)皮生長因子C對大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf
- 膽綠素抑制過氧化氫誘導(dǎo)的大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞凋亡及其機(jī)制探討.pdf
評論
0/150
提交評論