消退素D1對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮屏障破壞的保護(hù)作用.pdf

1、目的：本研究的目的是探討RvD1對(duì)LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮屏障破壞的保護(hù)作用。
　　方法：將培養(yǎng)好的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株分為6組:(1)LPS(400ng/ml)刺激組;(2)空白組,不經(jīng)任何處理;(3)RvD1(100ng/ml)組;(4)LPS(400ng/ml)+RvD1(100ng/ml)組;(5)LPS(400ng/ml)+RvD1(100ng/ml)+PDTC組;(6)LPS(400ng/ml)+RvD1(100ng/ml)+P

2、D98059組。(3)(4)組先加RvD1,30min后給予LPS,共同孵育6h;(5)(6)組先加PDTC或PD98059孵育30分鐘后再加RvD1,30min后給予LPS,共同孵育6h。通過FITC-Dextran的熒光強(qiáng)度來檢測內(nèi)皮細(xì)胞的通透性。免疫熒光法觀察緊密連接蛋白zo-1及occludin的分布情況和F-actin應(yīng)力纖維形成情況。免疫印跡法檢測zo-1,occludin,p-ERK1/2,IκBα的蛋白表達(dá)量。
　

3、　結(jié)果：(1)與對(duì)照組相比,LPS刺激組的通透性明顯增加(P<0.01);與LPS刺激組相比,RvD1(100ng/ml)組夠明顯降低內(nèi)皮細(xì)胞的通透性(P<0.01);與LPS刺激組相比,LPS(400ng/ml)+RvD1(100ng/ml)組能夠有效地降低細(xì)胞通透性(P<0.01)。
　　(2)對(duì)照組F-actin隨機(jī)分布在細(xì)胞的周圍,穩(wěn)定細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),zo-1,occludin在細(xì)胞邊緣形成了致密帶;LPS刺激組與對(duì)照組相

4、比,F-actin重新分布,在細(xì)胞中央形成了大量的應(yīng)力纖維,zo-1,occludin染色沿著細(xì)胞邊緣消失不見,細(xì)胞與細(xì)胞之間出現(xiàn)明顯的間隙;RvD1(100ng/ml)組與對(duì)照組相比沒有明顯區(qū)別;與LPS刺激組相比,LPS(400ng/ml)+RvD1(100ng/ml)組,zo-1,occludin恢復(fù)了線性結(jié)構(gòu)。
　　(3)與對(duì)照組相比,LPS刺激組zo-1(P<0.01),occludin(P<0.01)的蛋白水平表達(dá)明顯

5、下調(diào),IκBα的蛋白表達(dá)量也下降(P<0.01);與LPS刺激組相比LPS(400ng/ml)+RvD1(100ng/ml)組zo-1(P<0.01),occludin(P<0.01),IκBα(P<0.05)的蛋白水平接近對(duì)照組;但是P-ERK1/2的磷酸化水平在各組之間沒有變化;與LPS(400ng/ml)+RvD1(100ng/ml)組相比,LPS(400ng/ml)+RvD1(100ng/ml)+PDTC組的occludin蛋白