胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素在口腔鱗癌中的表達及意義.pdf

1、研究背景:
　　頭頸部惡性腫瘤約占全身惡性腫瘤的5.6％，其中80％是鱗癌。而口腔鱗癌是頭頸部惡性腫瘤中比較常見的惡性腫瘤之一。近幾年來，隨著對于腫瘤發(fā)病機制和治療的研究進展，口腔鱗癌的生存率有了顯著提高，5年生存率約60％。口腔鱗癌的發(fā)病是一個多因素多步驟的過程，包括眾多的致病因素，如放射線、不良牙體刺激等物理因素，酒精、煙草等化學刺激，微量元素的缺乏等營養(yǎng)因素，等等。最近幾年，隨著腫瘤免疫學的研究進展，對于口腔腫瘤致病的免疫學

2、研究受到了越來越多的重視。機體免疫調(diào)節(jié)機制的改變，腫瘤特異性抗原改變都有可能導致機體對于腫瘤細胞免疫監(jiān)視的缺失，造成腫瘤細胞的免疫逃逸，導致腫瘤的發(fā)生。
　　胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素(thymic stromal lymphopoietin，TSLP)是一種與IL-7類似的細胞因子，由Friend1994年從胸腺基質(zhì)細胞的培養(yǎng)上清中分離獲得。TSLP在免疫學領域研究較多，TSLP的主要作用是可以促進T細胞增殖以及B淋巴細胞的生長、分

3、化，而且與樹突狀細胞的成熟、活化和遷移的調(diào)控密切相關，并在胸腺的調(diào)節(jié)性T細胞分化中發(fā)揮重要作用。TSLP可以在多種組織細胞中表達，包括部分腸道上皮、受刺激后的胃粘膜、食管黏膜上皮、心臟、肝臟、前列腺細胞等等。最近的幾年研究發(fā)現(xiàn)，TSLP可以在多種腫瘤細胞中表達，包括乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、肺癌，等等。腫瘤中的TSLP可以促進Th2型細胞的增殖、分化或募集，并與多種腫瘤細胞的增殖和血管生成密切相關。
　　關于TSLP在口腔鱗癌中的

4、表達的研究罕見報道。本文擬采用多種實驗方法研究口腔鱗癌組織中的TSLP的表達，并且探討TSLP在口腔鱗癌細胞中的表達和腫瘤細胞的增殖、腫瘤微環(huán)境中免疫狀態(tài)的改變的關系，以期為口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展機制研究提供參考。
　　第一部分口腔鱗癌中TSLP的表達及臨床意義
　　口腔鱗癌是頭頸部惡性腫瘤的的一種常見的腫瘤。胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素是一種與IL-7類似的細胞因子，可以在多種組織細胞和免疫細胞表面有表達。最近的研究發(fā)現(xiàn)TSLP可以

5、在多種腫瘤細胞中有表達，可以通過多種機制促進腫瘤的發(fā)生和進展。但是TSLP在口腔鱗癌中的表達還未見報道。鑒于此，本部分實驗首先研究TSLP在口腔鱗癌中的表達情況，并探討其與臨床病理參數(shù)的關系。
　　目的與方法
　　選取30例具有完整臨床病理資料的口腔鱗癌患者的組織學標本和外周血為研究對象，并選取10例正常的口腔黏膜作為對照，采用免疫組化的方法和RT-PCR方法，分別從蛋白水平和mRNA水平比較TSLP、TSLP-R在口腔鱗癌

6、和正常組織中的表達的差異，并用ELISA方法比較口腔鱗癌患者和正常對照外周血中TSLP濃度的變化，結(jié)合患者的臨床病理資料，分析TSLP在口腔鱗癌中的表達及與臨床病理參數(shù)之間的關系。
　　結(jié)果
　　通過免疫組化的染色，我們發(fā)現(xiàn)TSLP和TSLP-R在口腔鱗癌組織及癌旁組織中都呈高表達，而在正常組織的上皮細胞中僅僅是弱表達或者無表達，鱗癌組織中TSLP的mRNA的量是正常組織中的1.9185倍，口腔鱗癌組織和正常對照組織中的TS

7、LP-mRNA的相對表達量分別為0.016516±0.003522和0.008609±0.00045;口腔鱗癌患者外周血中TSLP的平均濃度是26.16±13.37，而正常對照的外周血濃度是3.35±3.31，患者組的TSLP的濃度顯著高于對照組（P＜0.001）?？谇击[癌患者腫瘤細胞中的TSLP的表達與患者的臨床分期、病理分級、年齡、性別都無顯著相關性。口腔鱗癌細胞本身及周圍浸潤淋巴細胞同時存在著TSLP-R的高表達，染色集中在胞漿中

8、和胞膜上。TSLP-R在口腔鱗癌和癌旁組織中的表達并無顯著差異，但是都顯著高于正常的對照組織。
　　結(jié)論
　　口腔鱗癌組織及癌旁組織中存在著較高的TSLP和TSLP-R的表達，口腔鱗癌患者的組織和外周血中TSLP和TSLP-R的表達都顯著高于正常對照，口腔鱗癌組織中TSLP和患者的臨床病理參數(shù)之間并無顯著相關性。但是腫瘤細胞分泌的TSLP可以直接作用于自身及周圍浸潤的大量淋巴細胞。
　　第二部分口腔鱗癌中TSLP和FO

9、XP3的表達及關系研究
　　腫瘤微環(huán)境中的免疫調(diào)節(jié)的改變是促進腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素。前期的實驗中發(fā)現(xiàn)了口腔鱗癌組織中存在著TSLP和TSLP-R的高表達。TSLP-R不但可以表達在腫瘤細胞自身，還可以表達在腫瘤周圍浸潤的淋巴細胞的表面。TSLP無論在外周還是在胸腺中，都可以誘導Treg細胞的分化成熟，腫瘤的微環(huán)境中存在的CD4+CD25+Treg細胞本身即是一種重要的免疫調(diào)節(jié)細胞，它可以抑制機體對于腫瘤細胞的特異性的免疫反應，導

10、致腫瘤的免疫逃逸。FOXP3是CD4+CD25+Treg的功能狀態(tài)的特異性的抗原。本實驗就是通過研究口腔鱗癌組織微環(huán)境中存在的FOXP3+的Treg細胞，結(jié)合TSLP和TSLP-R的表達，探討TSLP在口腔鱗癌中的表達與FOXP3+淋巴細胞之間可能存在的關系。
　　目的及方法
　　選取30例具有完整臨床病理資料的口腔鱗癌患者的組織學標本作為研究對象，首先運用免疫組化的單染，研究FOXP3在口腔鱗癌組織中的表達，結(jié)合TSLP-

11、R在組織中的表達狀況，運用免疫組化雙染TSLP-R和FOXP3，研究口腔鱗癌中表達的TSLP和FOXP3+的淋巴細胞之間的關系，從而探討TSLP在口腔鱗癌組織微環(huán)境中免疫學調(diào)節(jié)改變的作用。
　　結(jié)果
　　1.口腔鱗癌組織中可見較多的FOXP3陽性淋巴細胞的存在。腫瘤組和癌旁組FOXP3+陽性淋巴細胞比例分別為（23.32±4.30）％VS（18.24±4.80）％，而正常的對照組中FOXP3+淋巴細胞則罕見。口腔鱗癌組織和癌

12、旁組織中FOXP3陽性淋巴細胞比例都顯著高于口腔正常對照黏膜組織。癌旁組織中，同樣可見大量的FOXP3陽性的淋巴細胞存在。
　　2.口腔鱗癌細胞巢周圍浸潤的淋巴細胞中可見較多的TSLP-R陽性的淋巴細胞，呈團或散在存在。
　　3.在口腔鱗癌組織的浸潤的淋巴細胞中，存在著一定數(shù)量的的TSLP和FOXP3雙染的淋巴細胞。在轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中，我們也發(fā)現(xiàn)了部分的雙染細胞的存在，而在正常淋巴結(jié)中則并沒有發(fā)現(xiàn)雙染細胞的存在。
　　結(jié)

13、論
　　口腔鱗癌組織中不但存在著大量的FOXP3陽性的淋巴細胞浸潤，而且在這些FOXP3+細胞的表面還存在著一定數(shù)量的TSLP-R，口腔鱗癌細胞中分泌的TSLP，通過作用于表面具有TSLP-R的淋巴細胞，促進FOXP3+Treg細胞的分化，成熟或聚集，同時淋巴結(jié)內(nèi)存在的TSLP，通過作用于TSLP-R表達陽性的淋巴細胞，也可誘導FOXP3+的Treg淋巴細胞的分化及募集，而后者保護轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌細胞免于淋巴細胞的殺滅作用，促進口腔

14、鱗癌的淋巴轉(zhuǎn)移。
　　第三部分TSLP與口腔鱗癌細胞增殖的關系研究
　　腫瘤細胞的失控增殖是腫瘤發(fā)生的重要因素。在第一部分實驗中我們發(fā)現(xiàn)了口腔鱗癌細胞不但可以分泌大量的TSLP，存在著TSLP的高表達，并且發(fā)現(xiàn)了TSLP-R在自身胞漿和胞膜中的表達?？谇击[癌分泌的TSLP可以通過與其表面表達的TSLP-R結(jié)合，以自分泌的方式作用于腫瘤細胞自身。TSLP在最初發(fā)現(xiàn)時即發(fā)現(xiàn)具有促進細胞增殖的作用，組織細胞中分泌的TSLP可以直接

15、或間接的促進多種組織或免疫細胞的增殖?？谇击[癌中分泌的TSLP通過與自身的受體結(jié)合對于口腔鱗癌細胞的增殖又是否有關呢？因此本部分實驗的主要目的就是探討口腔鱗癌腫瘤細胞中分泌的TSLP與自身增殖的關系。
　　目的與方法
　　選取口腔鱗癌Tca8113細胞系作為研究對象，培養(yǎng)稀薄，待細胞恢復活力后，分別在細胞的培養(yǎng)基中加入TSLP、TSLP中和抗體，并且設立陰性對照，在不同時間點，運用MTT法研究細胞的增殖狀況并加以比較，分析三

16、組間細胞增殖的變化，探討TSLP對于Tca8113細胞增殖的作用。
　　結(jié)果
　　1.分別加入TSLP、TSLP中和抗體及PBS24小時后，三組細胞均出現(xiàn)了不同程度的增殖現(xiàn)象，其中TSLP組的增殖稍高于對照組和TSLP中和抗體組，但是差別無統(tǒng)計學意義。而對照組和TSLP中和抗體組的增殖無明顯差異。
　　2.加藥48小時，TSLP組和對照組的腫瘤細胞均出現(xiàn)了較為明顯的增殖，但是TSLP組的增殖更為明顯，而TSLP中和抗體

17、組的增殖緩慢，三組相比較，發(fā)現(xiàn)TSLP組的增殖顯著高于對照組及中和抗體組，而對照組和中和抗體組的增殖差別并不明顯。
　　3.加藥后72小時，對照組和TSLP組均出現(xiàn)了更為明顯的增殖，三組相比較，TSLP組顯著高于中和抗體組和對照組，而對照組的增殖也顯著高于中和抗體組，差別具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論
　　口腔鱗癌細胞分泌的TLSP可以直接作用于自身腫瘤細胞，促進腫瘤細胞的增殖，TSLP對于細胞的增殖促進作用，在口腔鱗癌發(fā)