飼料、血液及尿液中多族藥物L(fēng)C-MS-MS檢測方法的建立和驗(yàn)證.pdf

1、動物使用的飼料會對人類的公共健康產(chǎn)生重要的影響。動物性飼料管理規(guī)定如藥品一樣，遠(yuǎn)比食用性產(chǎn)品的管理規(guī)定要嚴(yán)格，并且飼料在上市前需要進(jìn)行安全性和有效性的檢測考察。對于飼料的關(guān)注不僅僅是因?yàn)槭褂盟桂B(yǎng)動物，而且還是為了彌補(bǔ)確保飼料和食物供應(yīng)安全的管理規(guī)定和系統(tǒng)的漏洞。盡管了解了動物飼料對于公眾健康的重要性，然而是否需要將飼料管理制定成類似藥品管理那樣，還取決于該飼料的實(shí)際使用程度。本方法旨在同時篩查、確證和定量飼料中的更多的不同極性和解離程

2、度的獸藥。本方法使用D-SED聯(lián)合超聲提取，利用LC-MS/MS對多種目標(biāo)基質(zhì)進(jìn)行檢測。方法關(guān)注的是飼料中動物源性食品自身的以及允許使用和禁止使用的藥品添加劑。該方法基于高選擇性和高靈敏性的LC-MS/MS，建立了飼料、尿液、血清和血漿這四種基質(zhì)中的分析方法。本方法實(shí)現(xiàn)了對于25個不同類別共200種禁止在飼料添加劑使用的獸藥進(jìn)行同時檢測定量和確證，包括，β-內(nèi)酰胺類，β-激動劑，β-阻斷劑，磺胺類，非甾體抗炎藥類，類固醇，喹諾酮類，諾酮

3、類，大環(huán)內(nèi)脂類，抗球蟲藥，哌啶類，胺類，青霉素類，糖苷類，氨基糖苷類，哌嗪類，嘌呤類，酰胺類，四環(huán)素類，咪唑類等。確證的依據(jù)是歐盟2002/657/EC規(guī)定，此規(guī)定包括了對方法的使用和結(jié)果的說明。確證標(biāo)準(zhǔn)采用如下指標(biāo)，包括特征性、線性曲線、準(zhǔn)確度、精確度、重復(fù)性、CCα、CCβ，確保了此方法適用于多種藥物的篩查，以及較寬的濃度檢測范圍。最初優(yōu)化的提取方法和儀器參數(shù)是在確定篩查方法之后。我們采取在單個實(shí)驗(yàn)室連續(xù)4天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，通過分析添加空

4、白樣品考察基質(zhì)效應(yīng)、回收率、日內(nèi)重復(fù)和日間重復(fù)，添加濃度分別為1、2、5、10、50和100ppb，每個濃度重復(fù)5次，計(jì)算平均回收率，標(biāo)準(zhǔn)偏差，CCα，CCβ，LOD and LOQ。
　　不同獸藥不同的物化特性給實(shí)驗(yàn)帶來了非常大的挑戰(zhàn)。飼料樣品的提取和凈化通過分析樣品空白添加而獲得，樣品提取液為包含0.3％ EDTA-Na2的甲醇/乙腈/檸檬酸緩沖液(37.5/37.5/25，v/v/v)pH4.6的混合溶液，凈化采取加入QuE

5、ChERS推薦的PSA進(jìn)行D-SPE。平均回收率為52％-109％，對應(yīng)的RSD％為2％-20％，超過77％獸藥的回收率在65-109％之間，CCα在0.2-1.3μg/kg之間，CCβ在0.3-1.5μg/kg之間。對于尿液基質(zhì)而言，采用β芳基硫酯酶酶解的方式孵育3小時，然后加入包含0.3％ EDTA-Na2的甲醇/乙腈/琥珀酸緩沖液(37.5/37.5/25，v/v/v)pH4.6的混合溶液，凈化同樣采取PSA，平均回收率為50-1

6、33％，對應(yīng)的RSD％為2％-23％，LOD在0.02-33.3μg/L間，LOQ在0.07-111μg/L之間。血液基質(zhì)的前處理方法和飼料一樣，平均回收率為48％-122％，LOD在0.02-30μg/L間，LOQ在0.07-100μg/L之間.
　　該實(shí)驗(yàn)的目的是為當(dāng)今市面上廣泛使用的飼料產(chǎn)品提供相對簡單，重復(fù)性高，靈敏度高的檢測方法，并兼顧主要的動物源性食品（包括奶牛，家禽，豬和主要的動物物種）。為所有檢測的獸藥的定性和定量

7、檢測提供了可能性，并且說明本方法適合其他復(fù)雜的基質(zhì)。樣品采自當(dāng)?shù)貏游镲暳习踩块T，每一個陽性結(jié)果都通過液相色譜質(zhì)譜進(jìn)行確證。本方法成功的對一批含有多種獸藥殘留的實(shí)際樣品進(jìn)行檢測。檢測的57個實(shí)際樣品中獸藥的殘留為0.18-111μg/kg，使用最多的是磺胺嘧啶類藥物，22個實(shí)際血漿樣品中獸藥的殘留為0.2-1.9μg/L。
　　目前已有很多針對動物飼料中藥品添加劑檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)。本研究的主要目的是對商業(yè)現(xiàn)存的動物飼料殘留的多種