LC-MS-MS法同時(shí)測(cè)定牛奶樣品中25種獸藥殘留.pdf

1、牛奶是人們?nèi)粘Ｉ钪械谋匦杞M成部分，然而牛奶及其制品的質(zhì)量安全問題時(shí)有發(fā)生。牛奶的獸藥殘留主要來自于奶牛的疾病預(yù)防及治療過程中所使用的藥物。牛奶中獸藥超標(biāo)后會(huì)產(chǎn)生多種危害：如牛奶發(fā)酵異常；過敏；菌群失調(diào)；甚至?xí)禄?、致癌、致突變；破壞生態(tài)環(huán)境；影響畜牧業(yè)的發(fā)展等。歐盟、日本、加拿大、中國(guó)等國(guó)家已經(jīng)建立了部分獸藥在動(dòng)物性食品中的最大殘留限量（MRLs），以此來監(jiān)管食品的安全性。本文采用高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）為

2、檢測(cè)手段，對(duì)牛奶中25種獸藥（8種β-內(nèi)酰胺類、5種喹諾酮類、5種β-受體激動(dòng)劑類、3種氯霉素類、3種糖皮質(zhì)激素類及呋喃唑酮）定量分析方法進(jìn)行了研究及確證。具體內(nèi)容如下：
　　一、建立了LC-MS/MS同時(shí)檢測(cè)牛奶樣品中25種獸藥的方法
　　綜合考慮六類獸藥的理化性質(zhì)，經(jīng)多次優(yōu)化，最終確定的定量方法如下：牛奶樣品用乙腈提取，提取液經(jīng)正己烷除去其中的脂溶性雜質(zhì)，脫脂步驟重復(fù)一次，經(jīng)35℃氮吹儀蒸干，殘?jiān)靡译?水（V:V=5:

3、95）溶解，所得溶液經(jīng)高速離心機(jī)離心除去雜質(zhì)，過0.22μm有機(jī)濾膜。用乙腈（0.1％甲酸）-水體系進(jìn)行梯度洗脫，采用Waters X-Bridge C18（5.0 um,2.1 mm×100 mm）色譜柱進(jìn)行分離，以多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)方式，在正、負(fù)離子模式同時(shí)掃描下，用 HPLC-MS/MS法進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量。
　　為了確保該方法對(duì)25種分析物至少在最大殘留限量時(shí)有足夠高的靈敏度，根據(jù)歐盟委員會(huì)決議2002/657/EC完成方法

4、確證，包括特異性、確定限（CCα）、檢測(cè)容量（CCβ）、回收率、精密度、準(zhǔn)確度、線性及穩(wěn)定性等項(xiàng)目。驗(yàn)證結(jié)果為：恩諾沙星、氧氟沙星、氯霉素、氫化可的松、地塞米松、氟苯尼考在0.1~10 ng/mL，沙丁胺醇、特布他林、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、司帕沙星在0.2~50 ng/mL，萊克多巴胺、氯丙那林、潑尼松、甲砜霉素、氨芐西林、苯唑西林、氯唑西林在0.5~50 ng/mL，克倫特羅、哌拉西林、頭孢哌酮在1~100 ng/mL，青霉素G、頭孢唑

5、林在4~256 ng/mL，呋喃唑酮在4~128 ng/mL，頭孢氨芐在12~384 ng/mL范圍內(nèi)線性良好；在牛奶中規(guī)定有 MRLs值的分析物，其 CCα在0.32~113.68μg/kg之間， CCβ在0.36~125.75μg/kg之間；在牛奶中無(wú)MRLs值的分析物，其CCα在0.01~2.80μg/kg之間， CCβ在0.01~3.09μg/kg之間；25種分析物在低、中、高三個(gè)加標(biāo)水平下的絕對(duì)回收率分別在65.9%~123.

6、5%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于7.76%，準(zhǔn)確度在85.08%~114.6%之間，日內(nèi)和日間精密度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均在0.89%~11.03%之間，且加標(biāo)樣品在-20℃放置3天和7天均穩(wěn)定。方法學(xué)驗(yàn)證表明本方法對(duì)25種獸藥的濃度測(cè)定準(zhǔn)確可靠。
　　二、運(yùn)用LC-MS/MS分析方法對(duì)市面上的牛奶進(jìn)行檢測(cè)
　　從市場(chǎng)購(gòu)置四種品牌共20份的牛奶樣品，依照文中牛奶樣品預(yù)處理方法處理后，經(jīng)液質(zhì)分析。發(fā)現(xiàn)3份陽(yáng)性樣品，其中兩份樣品檢出了氯丙