LC-MS-MS分析方法的建立及其在生物等效性研究中的應(yīng)用.pdf

1、根據(jù)國家藥品安全“十二五”規(guī)劃，國家食品藥品監(jiān)督管理總局決定，對2007年修訂的《藥品注冊管理辦法》實(shí)施之前批準(zhǔn)的基本藥物和臨床常用仿制藥，分期分批的進(jìn)行質(zhì)量一致性評價(jià)。仿制藥質(zhì)量一致性主要是指物質(zhì)基礎(chǔ)和臨床療效兩個方面的一致。臨床療效的一致性主要是通過體外溶出試驗(yàn)和Ⅰ期臨床生物等效性研究來評估。可以說臨床驗(yàn)證（生物等效性研究）是仿制藥一致性評價(jià)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。仿制藥質(zhì)量一致性評價(jià)是持續(xù)提高藥品質(zhì)量的有效手段，對于提升制藥行業(yè)的整體水平，

2、保障公眾用藥的安全具有重要意義。生物等效性試驗(yàn)是比較同一種藥物相同或不同劑型的制劑，在相同的試驗(yàn)條件下，其活性成分吸收程度和速度有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的人體試驗(yàn)。高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)是目前生物等效性研究常用的分析方法，適合大多數(shù)藥物的檢測。本論文主要分兩部分內(nèi)容。
　　第一部分，LC-MS/MS分析方法的建立。
　　目的：對已參與實(shí)驗(yàn)藥物的LC-MS/MS分析方法的建立進(jìn)行總結(jié)，為今后快速的建立LC-MS/M

3、S分析方法奠定良好的基礎(chǔ)。
　　方法：本文結(jié)合自己在建立貝凡洛爾，蘭索拉唑，頭孢地尼，氟康唑，布桂嗪，瑞格列奈等藥物的LC-MS/MS分析方法的實(shí)踐，從質(zhì)譜條件的優(yōu)化，色譜條件的優(yōu)化，樣品前處理方法的選擇，內(nèi)標(biāo)的選擇等幾個主要方面，對LC-MS/MS分析方法的建立進(jìn)行了較為系統(tǒng)的分析梳理，初步總結(jié)了可供借鑒的心得。
　　結(jié)論：本論文總結(jié)提煉的生物樣本的LC-MS/MS分析方法的建立有實(shí)用參考價(jià)值，有助于提高工作效率。

4、　　第二部分，實(shí)例-LC-MS/MS法在鹽酸貝凡洛爾片生物等效性研究中的應(yīng)用。
　　目的：建立LC-MS/MS法檢測人血漿中貝凡洛爾濃度，并將其應(yīng)用到鹽酸貝凡洛爾片的生物等效性研究中。
　　方法：以普萘洛爾為內(nèi)標(biāo)，用正離子模式，MRM掃描方式進(jìn)行檢測定量，貝凡洛爾和內(nèi)標(biāo)離子對[M+H]+分別為m/z346.1-165.1和m/z260.3-116.1。血漿樣品以乙腈為沉淀劑沉淀蛋白。色譜柱為Ultimate C18柱(5μm

5、,2.1mm×150mm)，流動相為乙腈：10mM乙酸銨（含0.1％甲酸）水溶液（40:60,v/v）。
　　結(jié)果：該方法LLOQ為5.00ng/mL；線性范圍為5.00～1000ng/mL；批內(nèi)和批間精密度RSD均小于15％；提取回收率在91.98％～109.14％之間；內(nèi)標(biāo)歸一化的ME在96.79％～108.73％之內(nèi)?？崭?fàn)顟B(tài)下AUC0-36、AUC0-0-∞、Cmax的90％置信區(qū)間分別為95.6％～112.0％，95.9

6、％～111.8％，98.5％～118.6％。受試制劑相對生物利用度F0-36為（106.2?27.0）％。進(jìn)餐狀態(tài)下AUC0-36、AUC0-0-∞、Cmax的90％置信區(qū)間分別為93.4％～108.7％，93.9％～109.8％，92.8％～106.4％。受試制劑相對生物利用度F0-36為（102.9?20.5）％。
　　結(jié)論：該法符合生物樣品分析要求，已被應(yīng)用于鹽酸貝凡洛爾片生物等效性研究，結(jié)果表明兩制劑具有生物等效性。

7、>　　本論文突出之處：（1）本論文總結(jié)了平時在建立生物樣品的LC-MS/MS分析方法的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，為以后工作中快速的建立LC-MS/MS分析方法打下了良好的基礎(chǔ)；（2）在貝凡洛爾的分析測試中，首次建立了LC-MS/MS法檢測血漿中貝凡洛爾的藥物濃度，與文獻(xiàn)中的HPLC，GC相比，本論文采用簡單的蛋白沉淀法處理樣品，血漿用量少，僅為200ul；分析時間短，僅為3.5min；靈敏度高，LLOQ為5.00ng/mL。（3）本論文首次在中國健康受