轉人溶菌酶基因核移植克隆胚的發(fā)育研究.pdf

1、人溶菌酶作為一種天然蛋白質，由于其具有抗菌消炎、防腐保鮮的功能，被廣泛地應用于人們地生產(chǎn)生活中，但是從人體組織、器官中提取的人溶菌酶遠遠不能夠滿足人們的需要。因此，近年來，人們把目光投向了當前的基因工程技術，即利用原核或真核生物作為寄主細胞，來實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)人溶菌酶的目的。在此基礎上，乳腺生物反應器的研究成為了當前生物技術領域的熱點之一，而利用乳腺生物反應器生產(chǎn)生物活性蛋白的研究也迅速展開。 本實驗的目的在于為乳腺生物反應器提供

2、轉基因供體細胞，在以前的實驗基礎上，進行了以下研究工作： 1.采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)了牛耳皮膚成纖維細胞，脂質體轉染法轉染第四代成纖維細胞，載體為含綠色熒光蛋白和G418抗性基因雙重篩選標記的人溶菌酶乳腺特異性表達載體pEBH。利用PCR和RT-PCR的方法鑒定了轉基因陽性成纖維細胞中目的基因的表達，結果得到了陽性條帶。說明此次轉基因細胞可以作為轉基因動物供體細胞。 2.將以上轉基因細胞用于核移植時，為了說明轉基因細胞

3、對核移植后的重構胚的發(fā)育影響，設計了不同的實驗，得到了以下結果： (1)研究了基因轉染對重構胚發(fā)育的影響。實驗組以G418篩選4周的轉基因細胞為供體細胞進行核移植，對照組為非轉基因細胞。發(fā)現(xiàn)實驗組重構胚與對照組相比，融合率，卵裂率沒有顯著差異，但囊胚發(fā)育率轉基因組顯著低于對照組(P<0.05)，這說明基因轉染及篩選過程對轉基因重構胚的發(fā)育有不利的影響。 (2)比較不同的轉基因細胞挑選方法對轉基因克隆胚發(fā)育及陽性率的影響。