犬瘟熱病毒快速檢測方法建立和F基因克隆及序列分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、犬瘟熱是由犬瘟熱病毒感染引起的一種高度接觸性傳染病，是當(dāng)前對寵物飼養(yǎng)業(yè)、毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)和野生動物保護(hù)業(yè)危害最大的疫病之一。本研究針對目前CD臨床不易確診和病毒分離較為困難以及其對靈長類的獼猴和人也有CD感染病例的情況，建立CDV分子生物學(xué)檢測方法來解決該病病原診斷的難題，而重點在于建立CDV的RT-PCR和熒光定量RT-PCR快速檢測方法，為人們的身體健康和寵物業(yè)以及其它動物的健康發(fā)展提供技術(shù)保障。 本研究采集了福建地區(qū)多家寵物

2、醫(yī)院臨床發(fā)病寵物犬的多種分泌物：血液、尿液、唾液、鼻拭、眼分泌物等，根據(jù)以發(fā)表CDV F基因序列設(shè)計引物進(jìn)行RT-PCR、SYBR Green I熒光RT-PCR、Taqman實時熒光定量PCR的檢測，經(jīng)電泳證實，擴(kuò)增出的F基因片段和理論值一致。這三種檢測方法特異性、靈敏度高，可用于CDV的臨床快速檢測。 另外本實驗設(shè)計了三對引物對野毒株進(jìn)行擴(kuò)增F基因的全序列，對產(chǎn)物回收純化，克隆到PMD18-T載體，并轉(zhuǎn)化到E.coli DH

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