犬瘟熱病毒快速檢測(cè)方法建立和F基因克隆及序列分析.pdf

1、犬瘟熱是由犬瘟熱病毒感染引起的一種高度接觸性傳染病，是當(dāng)前對(duì)寵物飼養(yǎng)業(yè)、毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)和野生動(dòng)物保護(hù)業(yè)危害最大的疫病之一。本研究針對(duì)目前CD臨床不易確診和病毒分離較為困難以及其對(duì)靈長(zhǎng)類的獼猴和人也有CD感染病例的情況，建立CDV分子生物學(xué)檢測(cè)方法來(lái)解決該病病原診斷的難題，而重點(diǎn)在于建立CDV的RT-PCR和熒光定量RT-PCR快速檢測(cè)方法，為人們的身體健康和寵物業(yè)以及其它動(dòng)物的健康發(fā)展提供技術(shù)保障。 本研究采集了福建地區(qū)多家寵物

2、醫(yī)院臨床發(fā)病寵物犬的多種分泌物：血液、尿液、唾液、鼻拭、眼分泌物等，根據(jù)以發(fā)表CDV F基因序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行RT-PCR、SYBR Green I熒光RT-PCR、Taqman實(shí)時(shí)熒光定量PCR的檢測(cè)，經(jīng)電泳證實(shí)，擴(kuò)增出的F基因片段和理論值一致。這三種檢測(cè)方法特異性、靈敏度高，可用于CDV的臨床快速檢測(cè)。 另外本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了三對(duì)引物對(duì)野毒株進(jìn)行擴(kuò)增F基因的全序列，對(duì)產(chǎn)物回收純化，克隆到PMD18-T載體，并轉(zhuǎn)化到E.coli DH