組織型纖溶酶原激活劑基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體兔左心耳內(nèi)靶向溶栓研究.pdf

1、目的：了解組織型纖溶酶原激活劑(tPA)基因逆轉(zhuǎn)錄病毒載體局部轉(zhuǎn)導(dǎo)對特氟隆(Dacron)片的溶血栓作用。
　　 方法：70只健康大耳白兔(南京醫(yī)科大學(xué)動物實驗室提供)建立左心耳內(nèi)Dacron滌綸片植入后形成血栓模型，隨機(jī)分為PLEGFP-N1-tPA治療組(n=30)、PLEGFP-N1空白載體對照組(n=20)、完全空白對照組(n=20)，局部用基因轉(zhuǎn)導(dǎo)，在術(shù)后2天、75天各組用一半動物取材(共6個亞組分別為A1、B1、C1

2、、A2、B2、C2)，聚光共聚焦(confocal)顯微鏡觀察所取左心耳組織增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)表達(dá)，電視鏡和體視鏡觀察Dacron片表面形成血栓情況，用免疫印跡(Western blot)、酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)和血漿平板分別檢測所取組織tPA表達(dá)、溶栓、含量及其活性變化并比較結(jié)果。
　　 結(jié)果：術(shù)后2天和75天分別取材，治療組所取左心耳組織聚光共聚焦顯微鏡下均觀察到多而強(qiáng)的EGFP增強(qiáng)螢光表達(dá)，Plegfp

3、-N1對照組也有EGFP增強(qiáng)螢光表達(dá)，但空白對照組無EGFP增強(qiáng)型螢光表達(dá)。70個Dacron滌綸片加上未植入組10個Dacron滌綸片共80個，在體視鏡(×160倍)和電鏡(×500倍)下觀察，治療組和未植入組Dacron滌綸片表面均無血栓，對照組滌綸片表面觀察到均有血栓。治療組所取血樣標(biāo)本W(wǎng)estern blot檢測均有外源tPA表達(dá)，而對照組未檢測到。血漿平板檢測顯示：治療組均有明顯的溶解圈，有較強(qiáng)溶栓作用，而對照組沒有；根據(jù)蚓激

4、酶計算出的纖溶活性結(jié)果顯示：治療組后2天和75天所取組織tPA活性分別為(540.62±10.05)、(548.50±11.75)U/g，兩時間點比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。術(shù)后2天和75天治療組、兩對照組中6個亞組所取左房組織tPA含量分別為(A1743.24±11.39)、(B130.88±5.41)、(C129.91±5.69)、(A2744.67±11.86)、(B233.05±6.46)、(C231.74±5.83