毛囊真皮鞘細(xì)胞在皮膚創(chuàng)傷愈合中作用的研究.pdf

1、[目的]：對(duì)毛囊真皮鞘細(xì)胞在皮膚創(chuàng)傷愈合中的作用進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究，旨在為皮膚創(chuàng)/燒傷和病理性瘢痕治療研究提供新的思路。 [方法]：利用組織塊法原代培養(yǎng)大鼠觸須毛囊真皮鞘細(xì)胞，經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定，MTT檢測(cè)和光鏡、電鏡觀察細(xì)胞生長特性和超微結(jié)構(gòu)特征；對(duì)BrdU細(xì)胞標(biāo)記方法、檢測(cè)手段和創(chuàng)面細(xì)胞移植時(shí)機(jī)進(jìn)行優(yōu)化，建立動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?；通過超微結(jié)構(gòu)掃描電鏡定性觀察和瘢痕三維重建體積定量建立瘢痕評(píng)價(jià)體系：大鼠背部創(chuàng)面同

2、種毛囊真皮鞘細(xì)胞移植后，通過病理形態(tài)觀察和圖像分析對(duì)創(chuàng)面愈合及瘢痕形成進(jìn)行動(dòng)態(tài)定性和定量評(píng)價(jià)；采用RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光和免疫印跡技術(shù)分別從基因或蛋白水平檢測(cè)部分愈合相關(guān)蛋白在真皮鞘細(xì)胞中的表達(dá)。 [結(jié)果]： (1)毛囊真皮鞘細(xì)胞具有的生長特性和結(jié)構(gòu)特征：原代生長遲緩、傳代后增殖旺盛，呈克隆樣叢狀生長；細(xì)胞呈紡錘形，胞體豐滿；核/漿比較大，核仁較多，胞膜下存在多量條帶狀致密斑。 (2)建立了大鼠背部

3、創(chuàng)面可示蹤細(xì)胞移植模型：以終濃度為10μmol/L的BrdtJ標(biāo)記細(xì)胞，于致傷前移植，術(shù)后14 d的愈合組織中仍可見到植入細(xì)胞。 (3)建立了皮膚創(chuàng)傷愈合瘢痕評(píng)價(jià)體系：以瘢痕中膠原纖維和膠原原纖維的排列作為定性指標(biāo)；瘢痕體積作為定量指標(biāo)。 (4)毛囊真皮鞘細(xì)胞具有促進(jìn)皮膚創(chuàng)面愈合的作用：術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞移植組創(chuàng)面收縮率均大于對(duì)照組(P<0.01)；術(shù)后7d移植組新生肉芽組織中見不均勻分布的標(biāo)記細(xì)胞，14d標(biāo)記細(xì)胞減少并出

4、現(xiàn)凋亡；移植組愈合過程中肉芽組織形成、表皮再生、膠原增生、瘢痕形成和組織改建均較對(duì)照組提前，所形成的瘢痕量呈減少趨勢(shì)。 (5)真皮鞘細(xì)胞的促愈機(jī)制：細(xì)胞中Ⅰ型前膠原蛋白mRNA高表達(dá)，bFGF、EGFR和TIMP1在蛋白水平較皮膚成纖維細(xì)胞高表達(dá)。 [結(jié)論]：毛囊真皮鞘細(xì)胞為幼稚的間充質(zhì)細(xì)胞，具有潛在增殖能力；在皮膚創(chuàng)傷修復(fù)過程中參與肉芽組織的形成和膠原合成，具有一定的加速創(chuàng)面收縮、促進(jìn)愈合進(jìn)程和減少瘢痕形成的作用；該作