大鼠皮膚創(chuàng)傷愈合過程中SP的表達(dá)及其死后穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:推斷損傷時(shí)間及判斷生前傷與死后傷一直是法醫(yī)檢案中首要解決的問題,亦是法醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。目前關(guān)于損傷時(shí)間推斷的研究主要集中于腦和皮膚方面,皮膚是人體最大的器官且與外界直接接觸,亦是最易遭受創(chuàng)傷部位,因此皮膚損傷是法醫(yī)檢案中最常見的損傷。本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠創(chuàng)傷模型,應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù),觀察感覺神經(jīng)肽P物質(zhì)(Substance P,SP)與損傷時(shí)間的關(guān)系,探討大鼠皮膚創(chuàng)傷愈合過程中SP的表達(dá)變化規(guī)律,以及死后在不同溫度環(huán)境中的穩(wěn)

2、定性,從而為法醫(yī)學(xué)損傷時(shí)間的推斷提供一個(gè)新的補(bǔ)充參考指標(biāo)。
　　 方法:按照隨機(jī)分組原則,將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組再分為生前造創(chuàng)組、死后造創(chuàng)組、死后穩(wěn)定性-20℃、4℃和30℃組。生前造創(chuàng)組:在大鼠背部行造創(chuàng)手術(shù)后,依據(jù)各分組不同時(shí)間點(diǎn)將大鼠斷頸處死后,立即取創(chuàng)傷部位及創(chuàng)緣全層皮膚組織；死后造創(chuàng)組:將大鼠斷頸處死后,在其背部同一相應(yīng)部位行造創(chuàng)手術(shù),分別于術(shù)后0、0.5、1 h共3個(gè)時(shí)間點(diǎn)取手術(shù)部位皮膚組織；正常對(duì)

3、照組:不行造創(chuàng)手術(shù),將大鼠斷頸處死后即刻取材。死后穩(wěn)定性組:造創(chuàng)同生前造創(chuàng)組,于造創(chuàng)后6 d將大鼠斷頸處死,按分組情況分別置于-20℃、4℃、30℃溫度環(huán)境中,依據(jù)各分組不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取材。以上所取檢材均放入4％多聚甲醛-0.1mol/L PBS固定液中固定12 h、經(jīng)石蠟包埋后進(jìn)行切片,常規(guī)HE染色,免疫組織化學(xué)方法染色,觀察大鼠皮膚創(chuàng)傷后不同時(shí)間點(diǎn)SP的表達(dá)變化及其死后穩(wěn)定性,每張切片在400倍率光學(xué)顯微鏡下分別隨機(jī)觀察5個(gè)不同的視

4、野,測(cè)定SP陽性細(xì)胞率,取其平均值,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel和SPSS13.O分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:生前造創(chuàng)組:于皮膚切創(chuàng)后0.5 h,SP即在創(chuàng)緣周圍中性粒細(xì)胞中可見少量的SP陽性表達(dá),在創(chuàng)傷愈合中晚期增生的成纖維細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和毛細(xì)血管壁內(nèi)皮細(xì)胞也有SP表達(dá),至傷后4 d SP陽性表達(dá)達(dá)到峰值,隨后有所減弱,持續(xù)至傷后8 d仍可見較強(qiáng)陽性表達(dá),SP在損傷區(qū)及其周圍皮膚組織中表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05

5、)。死后造創(chuàng)組與正常對(duì)照組:SP僅在少數(shù)表皮,皮脂腺,汗腺上皮細(xì)胞呈弱陽性表達(dá),相比較無明顯差異。死后穩(wěn)定性各組在不同溫度環(huán)境下各時(shí)間點(diǎn)SP表達(dá)與死后即刻比較無顯著性差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論:在大鼠皮膚創(chuàng)傷愈合過程中SP的表達(dá)明顯強(qiáng)于正常對(duì)照組和死后造創(chuàng)組,在創(chuàng)傷早期SP主要在中性粒細(xì)胞表達(dá),中晚期則在成纖維細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和毛細(xì)血管壁內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞中表達(dá),SP在創(chuàng)傷愈合全過程中都發(fā)揮著重要作用,其變化隨創(chuàng)傷愈合的時(shí)