高壓氧對(duì)腦白質(zhì)疏松大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　腦白質(zhì)疏松(Leukoaraiosis，LA)是大腦深部的白質(zhì)脫髓鞘病變，與缺血性腦血管病密切相關(guān)，是腦小血管病的主要類型之一。腦小血管病引起的長(zhǎng)期慢性低灌注是腦白質(zhì)損傷的主要原因之一。低灌注可導(dǎo)致腦白質(zhì)缺血缺氧，而高壓氧治療是糾正缺血缺氧的有效手段。本文通過(guò)建立大鼠腦白質(zhì)疏松模型，觀察高壓氧對(duì)腦白質(zhì)疏松大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用并探討其作用機(jī)制，為高壓氧治療慢性低灌注腦白質(zhì)病的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法：
　　

2、1、動(dòng)物模型構(gòu)建:將雄性Wistar大鼠60只，隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組、手術(shù)組及術(shù)后HBO治療組，每組20只。采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法制作大鼠慢性低灌注腦白質(zhì)損傷模型，損傷持續(xù)14天，造模完成。
　　2、高壓氧干預(yù):大鼠造模完成后，給予高壓氧治療，治療壓力為2.0ATA，先氧氣洗艙時(shí)間10min，然后加壓時(shí)間15min，再穩(wěn)壓吸氧60min，最后減壓時(shí)間15min，艙內(nèi)溫度（23.3±2）℃。1次/天，共14次。
　　3、檢測(cè)

3、指標(biāo):
　　3.1行為學(xué)檢測(cè):術(shù)后14天腦白質(zhì)損傷形成，術(shù)后行定位航行試驗(yàn)，檢測(cè)學(xué)習(xí)和空間記憶能力的變化。
　　3.2組織染色及免疫組化:術(shù)后28天（高壓氧治療14天后），福爾馬林灌注取腦，分離其海馬組織，HE染色觀察大鼠海馬形態(tài)結(jié)構(gòu)，TUNEL染色，觀察神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況。少突膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡是腦白質(zhì)疏松髓鞘損傷的重要指標(biāo)，免疫熒光染色觀察各組髓鞘堿性蛋白（MBP）、少突膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物(CC1)、少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞標(biāo)記物(N

4、G2)的表達(dá)。
　　3.3細(xì)胞因子及基因蛋白定量檢測(cè):采用Western Blot法和RT-PCR分析分析TNF-α、IL-2、IL-6等炎癥因子的蛋白和mRNA水平。行Western Blot蛋白定量實(shí)驗(yàn)，選用TNF-α下游caspase-3、Akt、Bcl-2蛋白，確定高壓氧作用的信號(hào)通路。
　　3.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:本實(shí)驗(yàn)計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用方差分析進(jìn)行比較，SNK進(jìn)行組間差異比較。按α=0.05檢驗(yàn)水平，p＜

5、0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、行為學(xué)方面:雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎14天后行水迷宮實(shí)驗(yàn)，術(shù)后14-21天，手術(shù)組大鼠的逃避潛伏期明顯高于正常對(duì)照組和HBO治療組(p＜0.05);術(shù)后21-28天，HBO治療組與手術(shù)組比較，逃避潛伏期明顯縮短(p＜0.05)，HBO治療組與正常對(duì)照組比較，逃避潛伏期有縮短，但兩者相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)
　　2、組織染色及免疫組化:
　　2，1海馬HE染色及TU

6、NEL染色:術(shù)后28天，手術(shù)組與假手術(shù)組比，海馬神經(jīng)元核固縮、深染，胞漿嗜酸性增強(qiáng)，血管周組織間隙增寬;TUNEL染色可見(jiàn)手術(shù)組海馬區(qū)域內(nèi)較多細(xì)胞出現(xiàn)胞核棕黃色，即出現(xiàn)凋亡特征。HBO治療組與手術(shù)組比，海馬組織結(jié)構(gòu)較為完整，TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少，即凋亡神經(jīng)元明顯減少。HBO治療組與假手術(shù)組比，核固縮與TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞水平和數(shù)量基本相同，無(wú)明顯差異。
　　2.2MBP、CC1、NG2染色:術(shù)后28天取髓鞘蛋白表達(dá)最豐富的胼胝

7、體區(qū)進(jìn)行MBP、CC1、NG2染色，可見(jiàn)手術(shù)組較假手術(shù)組胼胝體區(qū)MBP明顯減少，NG2增多，CC1減少(p＜0.05)，HBO治療組較手術(shù)組MBP增多，NG2減少，CC1增多(p＜0.05)。手術(shù)組較假手術(shù)組胼胝體區(qū)IL-2、IL-6、TNF-α等炎癥因子均有升高;但HBO治療組較手術(shù)組IL-2、IL-6在無(wú)顯著差異(p＞0.05)，TNF-α明顯降低(p＜0.05)。RT-PCR結(jié)果提示，手術(shù)組較假手術(shù)組TNF-α，在mRNA水平有明

8、顯增高，HBO治療組較手術(shù)組TNF-α在mRNA水平明顯降低。
　　2.3凋亡相關(guān)因子及蛋白定量檢測(cè):Western Blot結(jié)果顯示手術(shù)組caspase-3表達(dá)較假手術(shù)組高，HBO治療組caspase-3表達(dá)較手術(shù)組降低(p＜0.05)。手術(shù)組Bcl-2和p-Akt表達(dá)較假手術(shù)組未見(jiàn)明顯異常，高壓氧治療后，Bcl-2和p-Akt表達(dá)有明顯升高(p＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈制作低灌注腦白質(zhì)疏松

9、模型可導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力的下降，引起海馬區(qū)損傷，細(xì)胞凋亡增多，髓鞘堿性蛋白和少突膠質(zhì)細(xì)胞減少，炎癥因子增多，促凋亡因子增多等。
　　2、高壓氧治療具有減輕海馬損傷，抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用，對(duì)神經(jīng)和膠質(zhì)細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。
　　3、高壓氧治療可減輕由于慢性腦缺血引起的髓鞘堿性蛋白(MBP)脫失，改善少突膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行性減少情況，促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞增生。
　　4、高壓氧對(duì)于腦白質(zhì)損傷的保護(hù)作用的可能機(jī)制是通過(guò)下調(diào)T